大家好...我是實驗室的新手
最近在利用RT-PCR做mRNA的semi-quantitation
但是發現同一管的cDNA每次PCR的產物在跑膠之後濃度都不太一樣
我在加入buffer或DNA等..時已經注意過都有混勻了
每次也都用同一枝pipetment來加..用同一台機器
所以我覺得自己操作的因素應該不大
請問各位有遇過同樣的問題嗎?...或是我有什麼地方沒注意到的?
感謝賜教...thanks
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 211.74.239.66
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: Highwind (小羊回來了) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 請問關於RT-PCR
時間: Fri Mar 18 00:22:39 2005
※ 引述《Dohko (...)》之銘言：
: 大家好...我是實驗室的新手
: 最近在利用RT-PCR做mRNA的semi-quantitation
: 但是發現同一管的cDNA每次PCR的產物在跑膠之後濃度都不太一樣
: 我在加入buffer或DNA等..時已經注意過都有混勻了
: 每次也都用同一枝pipetment來加..用同一台機器
: 所以我覺得自己操作的因素應該不大
: 請問各位有遇過同樣的問題嗎?...或是我有什麼地方沒注意到的?
: 感謝賜教...thanks
1.水不乾淨,cDNA decay
2.膠做不平,跑膠時溢散
PCR本來就不是拿來定量的,cycle數一多,變化大是應該的
所以Realtime PCR才會看CT值(我的觀念如有錯請指證)
RT-PCR還是把他限定在看"有沒有"或"差很多"的部分比較實際
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 219.68.85.208