作者littlebu (LittleBU)
看板Biotech
標題[問題] 請教關於RT-PCR的幾個問題
時間Mon May 22 23:25:04 2006
1. 我看Promega Oligo-dT的說明上寫它是18個T的Primer
請問這種Oligo-dT跟自己請廠商合成18個T會有什麼差異？
會比較好用？還是沒什麼差？
請問有LAB是請廠商合成18個T來用嗎？
2. 請問抽完RNA後的吸光值質量都不錯，結果轉出cDNA沒有成功
這樣是代表mRNA佔的比例太少？還是mRNA被破壞？還是其他可能原因？
因為還沒有跑RNA GEL，所以都只能猜測
3. 請問一般實驗室轉cDNA是取多少量的RNA? 我們是 2ug -> 20ul cDNA
請大家指點迷津，謝謝 TT
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◆ From: 219.87.224.176
→ littlebu:另外如果Negative有band, cDNA卻沒有,又是什麼情形 Orz.. 05/22 23:27
→ apa9394:bp是多大... 05/23 10:59
→ littlebu:跟產物一樣在194的位置，應該也不是primer亂接的 05/23 14:27
推 betrayme:RNA沒有跑膠確定品質的話就有可能是RNA的問題了 05/23 22:49
→ betrayme:一般都是5ug 的 RNA -----> 20ul cDNA (RT kit 上有建議) 05/23 22:51
推 littlebu:可惜我的RNA濃度不高,2ug都要靠濃縮了, 謝謝您的建議 05/23 23:53