[問題] 抽取RNA相關問題

[lucidol (台北-淡水)]

各位前被大大您們好

之前實驗室都是專門做關於E. coli與yeastDNA以及蛋白質表現方面.
但是突然老師要我做抽取RNA來做PCR

目前面臨問題是.因為實驗室裡學長姊沒做過RNA相關實驗.
老師也不是很清楚.問東問西找資料然後叫我找資料跟他討論

討論之後老師他本人解釋很怪很疑惑也很不確定.所以想請問有過RNA的前輩解惑

我想問的問題是:

1.實驗室沒專門做RNA的實驗桌及儀器(ex.離心機).老師跟我說用水擦一擦再用70 %ETOH
  清理過就可以操作RNA實驗.這樣的做法可行與否?

2.關於Tip,實驗室沒有新的tip盒,只有舊的.老師叫我把他一樣用水跟酒精交互清洗.
  就可以插tip去滅菌.贓贓的tip盒用這樣處理方式可以把RNase除去嗎?(實驗室的Tip
  是沒有棉花濾膜那一種)

3.關於pipette,老師也是叫我用水跟酒精交互擦拭做初步清潔,但我是想問用很久的
  pipette內部空腔不是都贓贓的容易污染?要怎麼清理內部減少RNase污染?用棉花
  棒清在直接高壓高溫滅菌?

4.操作過程中所使用的藥品,是不是都需要在RNase-Free場所配置?配置藥品所需用到水
  應該是拿DEPC-ddw吧?老師是跟我說像是phenol/chloroform拿抽DNA的那個來用就可以,
  這樣ok嗎?我很質疑他說的這一句

5.老師叫我用bead及acid phenol來做RNA extraction,那bead要怎麼處理去污染阿?
  用來裝的eppendorf要怎麼做預處理去除RNase?是直接滅菌??

6.實驗過程中可能會碰到冰箱跟離心機,我戴手套然後再碰這兩個器材會不會因為其
  他人沒戴手套就這樣把RNase附著到手套上面進而污染我的東西?(實驗室沒專門用
  RNA的冰箱,離心機以及場所)

  目前我只想到一些疑問,請各位前輩不令指教 謝謝

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 220.132.182.103
推 ROKEE:我會建議你實際去有在RNA操作的實驗室走一趟,這樣比較快上手
推 enisx:先把版上關於"RNA" 的討論文章全看過一遍,再翻翻書應該會有
→ enisx:點心得, 正式要作前,找個有經驗的人帶你或是如樓上說的,去
→ enisx:平常有在抽RNA的lab見習一下吧!
推 Nicoleching:嗯 只能說 我從來沒做過以上去污染的動作...抽的出來ꨠ
→ Nicoleching:就是抽的出來... 頂多滅滅菌帶口罩...
推 AcSn:我們lab也沒有專門做RNA但要抽RNA前就都滅菌50分一直都ok
→ AcSn:最多水會經過DEPC處理過滅菌再用囉~
→ ceci:滅菌機的高溫 確實可以去除RNase活性
→ ceci:小心處理Eppendorf外壁上的RNase也不會進到裡面 畢竟它有蓋子