請問各位有做過dsRNA的先進
要如何確定自己所合成的RNA是dsRNA呢?
因為我們之前認為合成後用RNaseA進行作用 可以將ssRNA吃掉 而不會影響到dsRNA
可是我實驗的結果 所合成有經過粘合的"dsRNA"卻也被切光光了
現在我無法確定到底是我合成的不好 還是RNaseA會切dsRNA
我使用的RNaseA作用濃度為50ug/ml 37度C 60分鐘
我查詢paper的結果 發現RNaseA在低鹽12mM MgCl2 的環境下有切dsRNA的活性
我想問的是 大家在確認dsRNA時 RNaseA作用是直接加入 還是有加特別的buffer
除了用RNase作用外有其他的方法可以確定所合成的是dsRNA 不是ssRNA
還是我RNaseA作用的濃度跟時間 溫度有特別的限制呢?
謝謝
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標 題: Re: [問題] 如何確認dsRNA
發信站: 不良牛牧場 (Sat May 21 10:34:54 2005)
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※ 引述《[email protected] (Qb)》之銘言：
: 請問各位有做過dsRNA的先進
: 要如何確定自己所合成的RNA是dsRNA呢?
: 因為我們之前認為合成後用RNaseA進行作用 可以將ssRNA吃掉 而不會影響到dsRNA
: 可是我實驗的結果 所合成有經過粘合的"dsRNA"卻也被切光光了
: 現在我無法確定到底是我合成的不好 還是RNaseA會切dsRNA
: 我使用的RNaseA作用濃度為50ug/ml 37度C 60分鐘
濃度好像太高囉
小弟竊以為2~3ug/ml就很夠了 ^^
畢竟8000元RNaseA只能泡10ml(10mg/ml) -_-
: 我查詢paper的結果 發現RNaseA在低鹽12mM MgCl2 的環境下有切dsRNA的活性
: 我想問的是 大家在確認dsRNA時 RNaseA作用是直接加入 還是有加特別的buffer
: 除了用RNase作用外有其他的方法可以確定所合成的是dsRNA 不是ssRNA
: 還是我RNaseA作用的濃度跟時間 溫度有特別的限制呢?
: 謝謝
比較好奇您合成的dsRNA兩端是否為blunt??
如果不是，被吃應該是正常的
不過或許環境中其他亂七八糟的東西也可能讓您的RNA被吃光
(ex:吐一口口水)
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作者: cutebetty (Qb) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 如何確認dsRNA
時間: Sat May 21 22:29:01 2005
※ 引述《[email protected] (死胖子超怕熱)》之銘言：
: 濃度好像太高囉
: 小弟竊以為2~3ug/ml就很夠了 ^^
: 畢竟8000元RNaseA只能泡10ml(10mg/ml) -_-
: : 我查詢paper的結果 發現RNaseA在低鹽12mM MgCl2 的環境下有切dsRNA的活性
: : 我想問的是 大家在確認dsRNA時 RNaseA作用是直接加入 還是有加特別的buffer
: : 除了用RNase作用外有其他的方法可以確定所合成的是dsRNA 不是ssRNA
: : 還是我RNaseA作用的濃度跟時間 溫度有特別的限制呢?
: : 謝謝
: 比較好奇您合成的dsRNA兩端是否為blunt??
: 如果不是，被吃應該是正常的
: 不過或許環境中其他亂七八糟的東西也可能讓您的RNA被吃光
: (ex:吐一口口水)
我確定我所合成的dsRNA是blunt end
而且RNaseA理當不會切雙股的才對
我後來查到有人處理是用1ug/ml的濃度 37度C 30分鐘
不過不知道會不會沒有切RNA的功效.. = =a
除了用RNaseA外 還有沒有其他方法可以證明所合成的是dsRNA呢?
還是我得合一個單股的RNA來當對照組試看看
我想老闆應該不會讓我浪費一個reaction一千多元來做test Orz
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