推 betrayme:請問您的A260/A280的值差不多是多少阿？ 140.112.76.97 08/16
→ betrayme:最近抽RNA也都不順，都degrade掉了... 140.112.76.97 08/16
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作者: aggaci (挖拍狼喔!!) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 用REzol TM C&T 抽RNA
時間: Sat Jun 25 14:08:49 2005
※ 引述《YuChHa (輔大生物37屆校友)》之銘言：
: ※ 引述《cycdodo (嘟嘟兒)》之銘言：
: : 請問板上的各位
: : 有沒有人用過REzol TM C&T 這種kit抽RNA呢??
: : 我們實驗室的學長姐以前抽都很正常
: : 我抽起來就degrade得很嚴重>"<(我抽了3次)
: : 我們實驗室沒有專門操作RNA的地方!
: : 我在操作時都會穿實驗衣戴口罩 手套
: : 另外
: : 我想請問一下
: : 是不是所有的reagent都是DEPC-treated??
: : 包含調pH質的酸&鹼??
我用invitrogen 的Trizol抽RNA
不需要調pH值
你的是什麼地方需要調pH值?
: : 並且formaldehyde一買來是不是要經過什麼處理才能用於操作RNA啊!?
No necessary
: : 因為我有跑RNA電泳 所以才發現RNA有degrade
: : 不過
: : 我怎麼知道是抽出來的RNA degrade還是在跑電泳時RNA degrade了呢??
應該是沒辦法知道..
: : ps.我的EtBr是跟sample一起loading的
: 一起loading??
: RNA往正極跑
: EtBr往負極跑
: 效果會不好吧
還好啦!不會跑的比較慢啦!
: 一般都是做膠時就先加進去
: 或是跑完後染吧
: : 感謝大家啊~~
--
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◆ From: 140.114.63.11
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作者: cycdodo (嘟嘟兒) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 用REzol TM C&T 抽RNA
時間: Sat Jun 25 22:07:04 2005
※ 引述《aggaci (挖拍狼喔!!)》之銘言：
: ※ 引述《YuChHa (輔大生物37屆校友)》之銘言：
: 我用invitrogen 的Trizol抽RNA
: 不需要調pH值
: 你的是什麼地方需要調pH值?
配一些buffer時用到
例如:跑電泳的running buffer
: No necessary
: 應該是沒辦法知道..
: : 一起loading??
: : RNA往正極跑
: : EtBr往負極跑
: : 效果會不好吧
: 還好啦!不會跑的比較慢啦!
: : 一般都是做膠時就先加進去
: : 或是跑完後染吧
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◆ From: 140.116.253.121
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作者: aggaci (挖拍狼喔!!) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 用REzol TM C&T 抽RNA
時間: Sun Jun 26 00:45:32 2005
※ 引述《cycdodo (嘟嘟兒)》之銘言：
: ※ 引述《aggaci (挖拍狼喔!!)》之銘言：
: : 我用invitrogen 的Trizol抽RNA
: : 不需要調pH值
: : 你的是什麼地方需要調pH值?
: 配一些buffer時用到
: 例如:跑電泳的running buffer
: : No necessary
: : 應該是沒辦法知道..
: : 還好啦!不會跑的比較慢啦!
1xMOPS嗎?我不調pH的....
你可以試試看不調pH值跑一次看看
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◆ From: 140.114.63.11
推 HIbaby:我也沒調過ph 219.1.156.27 06/26
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發信人: [email protected] (到頭來只是個墻外行人), 看板: Biotech
標 題: Re: [問題] 用REzol TM C&T 抽RNA
發信站: 無名小站 (Tue Jun 28 00:38:09 2005)
轉信站: ptt!Group.NCTU!grouppost!Group.NCTU!wretch
※ 引述《[email protected] (嘟嘟兒)》之銘言：
> 請問板上的各位
> 有沒有人用過REzol TM C&T 這種kit抽RNA呢??
我們家也是用TRIzol抽total RNA
這套組我沒見過 sorry
> 我們實驗室的學長姐以前抽都很正常
> 我抽起來就degrade得很嚴重>"<(我抽了3次)
> 我們實驗室沒有專門操作RNA的地方!
> 我在操作時都會穿實驗衣戴口罩 手套
你的tip, pipette, and tube等等是不是很乾淨
是否與操作一般實驗的用具分開(或者使用前用NaOH浸潤過)
桌面也要擦拭過
最好不要有明顯流動的氣體經過
我們家也都沒有專們操作RNA的地方 也沒什麼degradation發生
> 另外
> 我想請問一下
> 是不是所有的reagent都是DEPC-treated??
我是用dH2O再滅過菌就用上(幾乎沒有過degradation)
不過那些長期保存的reagent倒是會用DEPC-treated water
> 包含調pH質的酸&鹼??
這是一定要的 RNA比較適合用偏酸的環境
不然它很容易degrade
> 並且formaldehyde一買來是不是要經過什麼處理才能用於操作RNA啊!?
我們家也沒特別用什麼處理 只是會將RNA用的獨立出來
> 因為我有跑RNA電泳 所以才發現RNA有degrade
> 不過
> 我怎麼知道是抽出來的RNA degrade還是在跑電泳時RNA degrade了呢??
跑RNA 電泳不都用formalmide-agarose gel或是其他denature gel?
那怎麼會有degrade?
除非是loading buffer, running buffer等reagents有問題
==omitted some==
--
夫兵者不祥之器物或惡之故有道者不處君子居則貴左用兵則貴右兵者不祥之器非君子
之器不得已而用之恬淡為上勝而不美而美之者是樂殺人夫樂殺人者則不可得志於天下
矣吉事尚左凶事尚右偏將軍居左上將軍居右言以喪禮處之殺人之眾以哀悲泣之戰勝以
喪禮處之道常無名樸雖小天下莫能臣侯王若能守之萬物將自賓天地相合以降甘露民莫
之令而自均始制有名名亦既有夫亦將知止知止 218-167-3-166.dynamic.hinet.net海
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作者: ad1980 (DREAMCHASER) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 用REzol TM C&T 抽RNA
時間: Tue Jun 28 10:34:19 2005
※ 引述《cycdodo (嘟嘟兒)》之銘言：
: 請問板上的各位
: 有沒有人用過REzol TM C&T 這種kit抽RNA呢??
: 我們實驗室的學長姐以前抽都很正常
: 我抽起來就degrade得很嚴重>"<(我抽了3次)
: 我們實驗室沒有專門操作RNA的地方!
: 我在操作時都會穿實驗衣戴口罩 手套
: 另外
: 我想請問一下
: 是不是所有的reagent都是DEPC-treated??
: 包含調pH質的酸&鹼??
: 並且formaldehyde一買來是不是要經過什麼處理才能用於操作RNA啊!?
: 因為我有跑RNA電泳 所以才發現RNA有degrade
: 不過
: 我怎麼知道是抽出來的RNA degrade還是在跑電泳時RNA degrade了呢??
: ps.我的EtBr是跟sample一起loading的
: 感謝大家啊~~
我今天才剛做說...
不過我是用 TRIzol...
在 hood 裡做，有墊新的 bench paper...
tips...分開，RNA 專用
tube...我用普通 eppendorf tube，但是開新的用。
chloroform...新的，RNA 專用
H2O...milliQ H2O，RNA 專用，用於所有需要 H2O 的地方
last step: ON ICE right after disolving RNA pellet in H2O
gel...普通跑 DNA 的 1% gel w/ EtBr，
但是 gel tray 有用 soap 洗過。
comb 也是，外加泡在 H2O2 裡 for 10-15 mins
其他跑 gel 的 buffer 啥的就用普通實驗室共用的。
load with 3X RNA dye (6x DNA dye, 10% SDS, EtOH)
其他的跟平常一樣。
gel 跑出來沒問題。
供參考囉。
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絕不做會讓自己後悔的事，
做了就不要後悔。
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◆ From: 207.81.165.121
※ 編輯: ad1980 來自: 207.81.165.121 (06/28 10:36)
※ 編輯: ad1980 來自: 207.81.165.121 (06/28 10:44)
※ 編輯: ad1980 來自: 207.81.165.121 (06/28 10:47)
推 eriel:請問soap是什麼？ 140.116.145.51 06/29