[問題]用REzol TM C&T 抽RNA--解答篇

[cycdodo (嘟嘟兒)]

我終於知道為何我的RNA會degrade如此嚴重

其實不是kit的問題
不是操作問題
不是reagent的問題

是跑電泳時 我的RNA量下太多了 =.=

我把RNA的量減少後(大約5 ug)
跑出來的就很漂亮
28S 18S清晰可見
也可以看到些許5S

另外 我還發現
sample buffer太多或
loading buffer太多或
well太小都會讓電泳跑得不是很美

謝謝大家的幫忙囉^^

事情總算圓滿落幕^O^




※ 引述《cycdodo (嘟嘟兒)》之銘言：
: 請問板上的各位
: 有沒有人用過REzol TM C&T 這種kit抽RNA呢??
: 我們實驗室的學長姐以前抽都很正常
: 我抽起來就degrade得很嚴重>"<(我抽了3次)
: 我們實驗室沒有專門操作RNA的地方!
: 我在操作時都會穿實驗衣戴口罩 手套
: 另外
: 我想請問一下
: 是不是所有的reagent都是DEPC-treated??
: 包含調pH質的酸&鹼??
: 並且formaldehyde一買來是不是要經過什麼處理才能用於操作RNA啊!?
: 因為我有跑RNA電泳 所以才發現RNA有degrade
: 不過
: 我怎麼知道是抽出來的RNA degrade還是在跑電泳時RNA degrade了呢??
: ps.我的EtBr是跟sample一起loading的
: 感謝大家啊~~

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◆ From: 140.116.253.121
推 aggaci:是嗎 我有loading過10ug~20ug的歐...沒事哩
推 YuChHa:要看你是怎樣的gel.
推 aggaci:怎麼說?我跑Formadehyde denature RNA gel~
→ aggaci:願聞其詳
推 cycdodo:跑大well好像比較漂亮!(我們老闆說的...)
→ cycdodo:另外,gel的濃度也會影響嗎?!我都跑1%耶~