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煩請大家解答.... 我作加藥實驗..(Time course加藥實驗).10min.30min.1hr ...... 材料:cell-line C 10min 30min 1hr RNA量 ▂ ▂ ▂ ▃ ▂ ▂ ▆ ▆ 蛋白質量 (C=control) ========================================= RNA量...1hr的時候些微增加..可是蛋白質量..卻在30分鐘的之後就增加了...而且蛋白 量比control高出7.8倍之多~~ 這是啥意思??我操作上...是否有錯誤....???!!~~thanX -- 需要LeSportsac VIP卡卡號者~~歡迎回我信箱~~凡購買LS專櫃商品.可享VIP折扣~~^^~~ (消費時跟專櫃小姐報我的卡號.就可享有VIP折扣.歡迎來信^^) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.221.15.121 ※ 編輯: immortal 來自: 61.221.15.121 (01/05 11:31)
ghjkl:表示此protein的降解變慢了如HIF-1a若能有效抑制其降解 01/05 12:27
ghjkl:就能看到大量表現的現象了 01/05 12:28
immortal:降解??為什麼是降解呢??蛋白量是升高耶??!!... 01/05 12:44
kaiser1027:我想一樓的意思是protein degradation的rate下降 01/05 14:50
kaiser1027:因為蛋白質被分解的速率下降所以相對蛋白質的量上升 01/05 14:52
immortal:可是蛋白質上升比RNA上升還快30min...為何是降解速率下降 01/05 14:53
immortal:我要是跟老闆這樣講..會不會被打死??!!..... 01/05 14:54
immortal:可是我加入的藥劑..與蛋白質分解無關...是誰分解蛋白??.. 01/05 14:54
immortal:還是不太董...麻煩大家了!! 01/05 14:55
aggaci:很有趣的現象阿,為什麼會被打死? 01/05 15:05
aggaci:做個三重複,先確定再現性吧 01/05 15:05
immortal:跟老闆說因為蛋白降解變慢...so..蛋白上升RNA後上升.... 01/05 16:03
immortal:就像告訴別人自己掉近水溝..別人問why?我答:走路沒走好.. 01/05 16:03
immortal:RNA部分5重複~蛋白質部分3重複~~皆一模一樣..連量都一制! 01/05 16:04
immortal:再現性高........ 01/05 16:05
ghjkl:ubiqutilation若被抑制那protein degradation rate就會明顯ꐠ 01/05 16:15
ghjkl:下降 protein就自然會上升了 但這樣的情形比較適用於 01/05 16:18
ghjkl:turn over rate較快的蛋白 如HIF-1a就是這類的蛋白 01/05 16:19
ghjkl:平時HIF-1a就不斷的被生成跟降解而當受到刺激後 01/05 16:22
ghjkl:其降解會被抑制此時雖然RNA無明顯變化但protein卻能看到增加 01/05 16:23
ghjkl:至於你說的走路沒走好我到是看不懂事什麼意思耶 01/05 16:25
ghjkl:還有一種RNA量無明顯變化但protein卻能增加的方法就是 01/05 16:25
ghjkl:增加RNA的stability你可以研究一下P38相關反應應該就能了解 01/05 16:26
immortal:謝謝樓上的詳解..可是HIF1a是代謝性蛋白..ubiqutilation 01/05 16:57
immortal:是必須...但是我的蛋白不是代謝性蛋白...會不會有其他原 01/05 16:57
immortal:因可以解釋?而且我該蛋白...自30min後依然持續24hr.. 01/05 16:58
immortal:並沒有因此而ubiqutilation!! 01/05 17:00
blence:1.你如何排除不是因為抑制poly-Ub而變少呢? 2.你treatment 01/05 18:27
blence:何時洗掉呢? 3.相關的control有做好吧? 4.調整不同dose 01/05 18:28
blence:treatment,變化強弱或出現時間也跟著改變嗎? 試一下吧 01/05 18:30
immortal:謝謝樓上詳解 01/05 18:53