[問題] 也是有關螢光顯微鏡的問題？

[abcam (當愛一個人時 你也會變好)]

我是染FITC的..我染的蛋白是　alha-tubulin.and beta-tubulin..照道理

來說　應該　很好染才是　<----這是我自已想的。...

可是　我今天看了之後　大失所望　在視野底下　都是一顆一顆綠綠的...

但　照理說　應該要染到　類似紡垂絲那種感覺上　像絲狀的東西..

而　我染到的　是一顆一顆全綠的細胞.還染的很清楚..><".我感覺上　

這代表了....我”跟本就沒染進去呀”..因為　感覺上　就是　一抗接在細胞表面而二抗
也接了上去...還是？？？

可是　我都照著protocol  上面的東西　去直行呀..

所以　我猜想　是在fix和穿孔之間時　沒有處理好..

我的方法是　acetone-methanol v/v=1:1..的方試　　十分鐘

別家lab也是用此方法　還用的不錯也...

可以給點意見嗎／？

我是用１０００倍去看　　有用油鏡..

我的一抗　是１：５０ (兩小時）

而二抗　　是　１：１００　（一小時）

全程用　PBS　wash..

有用　1%的 BSA Blocking..(30 min)


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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 203.71.95.126
→ oplz:如果講述一抗或二抗時用 ug/ml 的方式 會
→ oplz:比較容易讓人瞭解情況... 50x, 100x 如果
→ oplz:是買來的 stock 直接取來用..濃度太高了
→ oplz:如果你是用 monoclonal antibody, tubulin
→ oplz:大概到 2000x (指 stock) 都可以染得很好
→ oplz:因為 tubulin 是 polymer..signal 會很強