[問題] 細胞染色

[enoch7 ()]

您好！

    小弟想對 "貼附性" 細胞做免疫染色，因此小弟會以

Trypsin 將細胞 detach，可是看書上說 Trypsin 會破壞

Surface Antigen，建議用 0.5% trypsin/0.5mM EDTA 或

是 0.5 mM EDTA取代，所以請問各位有類似的經驗嗎？

                                        Thank you~

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◆ From: 163.29.223.14

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發信人: [e-mail] (我是麥克林), 看板: Biotech
標  題: Re: [問題] 細胞染色
發信站: 批踢踢參 (Fri Sep  2 08:20:13 2005)
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※ 引述《[e-mail] ()》之銘言：
: 您好！
:     小弟想對 "貼附性" 細胞做免疫染色，因此小弟會以
: Trypsin 將細胞 detach，可是看書上說 Trypsin 會破壞
: Surface Antigen，建議用 0.5% trypsin/0.5mM EDTA 或
: 是 0.5 mM EDTA取代，所以請問各位有類似的經驗嗎？
:                                         Thank you~

  有,不過我不清楚 EDTA 的濃度是不是像你說的 0.5 mM

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◆ From: 220.109.159.16


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發信人: [e-mail] (到頭來只是個墻外行人), 看板: Biotech
標  題: Re: [問題] 細胞染色
發信站: 無名小站 (Tue Sep  6 00:47:58 2005)
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※ 引述《[e-mail]》之銘言：
> 您好！
>     小弟想對 "貼附性" 細胞做免疫染色，因此小弟會以
> Trypsin 將細胞 detach，可是看書上說 Trypsin 會破壞
> Surface Antigen，建議用 0.5% trypsin/0.5mM EDTA 或
> 是 0.5 mM EDTA取代，所以請問各位有類似的經驗嗎？
>                                         Thank you~
  不好意思地請教一下
  immunostain不是要讓細胞貼著會比較好操作嗎?
  為什麼還要trypsinize? 讓細胞跑來跑去?
--
夫兵者不祥之器物或惡之故有道者不處君子居則貴左用兵則貴右兵者不祥之器非君子
之器不得已而用之恬淡為上勝而不美而美之者是樂殺人夫樂殺人者則不可得志於天下
矣吉事尚左凶事尚右偏將軍居左上將軍居右言以喪禮處之殺人之眾以哀悲泣之戰勝以
喪禮處之道常無名樸雖小天下莫能臣侯王若能守之萬物將自賓天地相合以降甘露民莫
之令而自均始制有名名亦既有夫亦將知止知止 218-167-3-239.dynamic.hinet.net海

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作者: enoch7 () 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 細胞染色
時間: Wed Sep  7 11:38:55 2005

※ 引述《[e-mail] (到頭來只是個墻外行人)》之銘言：
: ※ 引述《[e-mail]》之銘言：
: > 您好！
: >     小弟想對 "貼附性" 細胞做免疫染色，因此小弟會以
: > Trypsin 將細胞 detach，可是看書上說 Trypsin 會破壞
: > Surface Antigen，建議用 0.5% trypsin/0.5mM EDTA 或
: > 是 0.5 mM EDTA取代，所以請問各位有類似的經驗嗎？
: >                                         Thank you~
:   不好意思地請教一下
:   immunostain不是要讓細胞貼著會比較好操作嗎?
:   為什麼還要trypsinize? 讓細胞跑來跑去?

您好！
    小弟所養的細胞平常是養在 dish 內，當免疫染色時，為
了節省抗體的使用量，會把細胞養在小玻璃片上，所以我必須
將細胞 detach。
    小弟想再請問一下，若是經過 Trypsin 作用後的 cell，
其 surface antigen 遭到破壞，但是持續 culture 幾天後，
這些 surface antigen 會重新恢復表現嗎？請問各位有類似
的經驗嗎？謝謝大家~

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 163.29.223.14
推 blence:何不把小玻璃片放在dish內呢？
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作者: aggaci (誰有HL-60阿~~~) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 細胞染色
時間: Wed Sep  7 18:20:53 2005

※ 引述《enoch7 ()》之銘言：
※ 引述《[e-mail] (到頭來只是個墻外行人)》之銘言：
: ※ 引述《[e-mail]》之銘言：
: > 您好！
: >     小弟想對 "貼附性" 細胞做免疫染色，因此小弟會以
: > Trypsin 將細胞 detach，可是看書上說 Trypsin 會破壞
: > Surface Antigen，建議用 0.5% trypsin/0.5mM EDTA 或
: > 是 0.5 mM EDTA取代，所以請問各位有類似的經驗嗎？
: >                                         Thank you~
:   不好意思地請教一下
:   immunostain不是要讓細胞貼著會比較好操作嗎?
:   為什麼還要trypsinize? 讓細胞跑來跑去?

您好！
    小弟所養的細胞平常是養在 dish 內，當免疫染色時，為
了節省抗體的使用量，會把細胞養在小玻璃片上，所以我必須
將細胞 detach。
    小弟想再請問一下，若是經過 Trypsin 作用後的 cell，
其 surface antigen 遭到破壞，但是持續 culture 幾天後，
這些 surface antigen 會重新恢復表現嗎？請問各位有類似
的經驗嗎？謝謝大家~

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◆ From: 163.29.223.14
推 blence:何不把小玻璃片放在dish內呢？

  有一種玻片是圓的
  可以放在24孔盤的well裡...剛剛好
  養細胞就跟blence說的一樣  可以把細胞養在上面


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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.114.63.11
推 bluep:補充:有些細胞不易貼附玻璃，要記得先coating喔...
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發信人: [e-mail] (六百), 看板: Biotech
標  題: Re: [問題] 細胞染色
發信站: 清華生命科學 BBS (Wed Sep  7 23:27:50 2005)
轉信站: ptt!Group.NCTU!grouppost!Group.NCTU!nthuls

※ 引述《[e-mail]》之銘言：
> 您好！
>     小弟想對 "貼附性" 細胞做免疫染色，因此小弟會以
> Trypsin 將細胞 detach，可是看書上說 Trypsin 會破壞
> Surface Antigen，建議用 0.5% trypsin/0.5mM EDTA 或
> 是 0.5 mM EDTA取代，所以請問各位有類似的經驗嗎？
>                                         Thank you~
如果只是要省抗體

其實連玻璃片都未必要用

直接養到 24 well 就好

用玻片主要是為了圖它薄而平 影像品質會較好

另外也可以考慮用 chamber slide

就是一種小小的 culture plate, 養好固定好以後可以把塑膠材質的 wells 整個拔掉

底下就是一片載玻片這樣 好用 但是也不便宜 為了省抗體用這個會不會划算就請斟酌吧
(其實這東西不是為了省抗體設計的...)

我也看過有人用 blue tip 跟載玻片自製 chamber slide 的... 只能說真神人也...

最後 回到原發問網友的問題

trypsin 處理再養一段時間 正常來講是很合理的

你想 你的細胞除非是 primary culture, 否則之前應該就有用 trypsin 處理過吧

如果 trypsin 處理過一次的的細胞就永遠沒有辦法把你要的蛋白質表現回來...

那最後一次用不用 trypsin 都是掛點啊 O_o

不過貼回玻片上以後要養多久 就各不相同了...

EDTA 處理我試過，但是是為了染某 receptor 以後馬上上 flow 連貼回去的動作都沒有

結果還算 ok
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莫非定律:
    到了期末才會想起期初曾選了一門課卻一直沒去上
補充定律:
    拿到成績單才發現上了一學期的課忘了去考期末考
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※ Origin: 生命科學 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw> 
◆ From: 210-85-213-142.cm.dynamic.apol.com.tw
推 enoch7:嗯嗯... 謝謝您~