推 KaurJmeb:100x是物鏡 還是目鏡x物鏡的倍數？ 218.35.20.159 01/08
→ KaurJmeb:你們的DAPI是哪一家的？dilute幾倍？ 218.35.20.159 01/08
→ KaurJmeb:隔了多久才上機？ 218.35.20.159 01/08
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作者 keku.bbs@bbs.ym.edu.tw (猋猋猋猋猋猋猋猋猋), 看板 Biotech
標題 Re: 請教一個問題 DAPI
時間 陽明大學神農坡資訊站 (Sat Jan 8 03:27:26 2005)
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※ 引述《pent.bbs@bbs.ccns.ncku.edu.tw (二八法則)》之銘言：
> 其實 超過100倍 要看也行
> 只是 鏡頭 會沾到DAPI的染液
> 有解決的方法嗎?
做玻片sandwitch 再用油鏡看
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作者 zamki (林小布) 看板 Biotech
標題 Re: 請教一個問題 DAPI
時間 Mon Jan 10 15:35:25 2005
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有可能染DAPI動作要快一點......DAPI螢光消失的滿快的.....
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********
PTT 統合生命科學研究院
Biotech 生物醫學科技研究所 腫瘤與免疫治療研究室
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.22.18.105
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作者 pent.bbs@bbs.ccns.ncku.edu.tw (二八法則), 看板 Biotech
標題 Re: 請教一個問題 DAPI
時間 夢之大地 (Mon Jan 10 16:21:55 2005)
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※ 引述《zamki.bbs@ptt.cc (林小布)》之銘言：
> 有可能染DAPI動作要快一點......DAPI螢光消失的滿快的.....
我是染了之後
置於陰暗處15 mins
然後就用螢光顯微鏡去看
不過我們的染劑裡面會加PBS
是10ul的DAPI + 10ml的PBS
保存期限是2個禮拜
這樣對嗎??
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作者 KaurJmeb ( ＫＪ) 看板 Biotech
標題 Re: 請教一個問題 DAPI
時間 Mon Jan 10 23:00:37 2005
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※ 引述《pent.bbs@bbs.ccns.ncku.edu.tw (二八法則)》之銘言：
: ※ 引述《zamki.bbs@ptt.cc (林小布)》之銘言：
: > 有可能染DAPI動作要快一點......DAPI螢光消失的滿快的.....
: 我是染了之後
: 置於陰暗處15 mins
: 然後就用螢光顯微鏡去看
: 不過我們的染劑裡面會加PBS
: 是10ul的DAPI + 10ml的PBS
: 保存期限是2個禮拜
: 這樣對嗎??
我以前做染DAPI實驗時，
稀釋的倍率更高，保存期限更長，
在100x物鏡下，還是非常亮。
如果你們實驗室普遍有這個情形，
看看要不要把DAPI分裝的濃度提高試試看。
除了標本的問題之外，
顯微鏡可能出現的問題有："物鏡太髒"。
這個問題很常見，因為大部分使用者都不太會正確保養物鏡 (←幾十萬的東西啊...)
另一個顯微鏡問題可能是"螢光濾片老化"。
這是螢光濾片本身壽命就會有的極限，
不過，如果讓顯微鏡處在一個溫度溼度穩定的空間下，
可以延長使用壽命。
還有一個顯微鏡的可能性是"螢光燈泡時數到了"
一般螢光顯微鏡的螢光燈源都有兩種以上的規格，
又各有瓦數不同。
同樣的標本，瓦數大的，螢光看起來較亮，
反之，瓦數小的，螢光看起來就較弱。
不同瓦數的燈泡，壽命也有所不同。
看一下使用登記本，或計數器，也許是燈泡快死了也說不定。
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◆ From: 218.35.20.159
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作者 gilchang.bbs@bbs.wretch.cc (短期代板主-無名BioTech), 看板 Biotech
標題 Re: 請教一個問題 DAPI
時間 無名小站 (Sat Jan 15 16:28:57 2005)
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※ 引述《pent.bbs@bbs.ccns.ncku.edu.tw (二八法則)》之銘言：
> 不知道來這裡問
> protocol對不對~
竟量問吧，這個版本來就是問些技術問題用的
> 因為我們實驗室的DAPI做出來都只能用
> 100倍螢光顯微鏡去看
> 超過100倍 就不夠亮了~
花了多少時間在UV下看DAPI? (seconds)
我們都是在一般光源下調好之後再調成UV看DNA....
你可以嘗試將進光量調少一些，
(如果儀器有支援，可以再將光源調暗一點)
> 其實 超過100倍 要看也行
> 只是 鏡頭 會沾到DAPI的染液
沾到??
samples上下不是都有玻片嗎? 還是做法不一樣?
我不是很清楚您所謂的沾到是什麼意思耶
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夫兵者不祥之器物或惡之故有道者不處君子居則貴左用兵則貴右兵者不祥之器非君子
之器不得已相簿 http://www.wretch.cc/album 有佈景主題 速度很快 可得志於天下
矣吉事尚左凶事尚右偏將軍居左上將軍居右言以喪禮處之殺人之眾以哀悲泣之戰勝以
喪禮處之道常無名樸雖小天下莫能臣侯王若能守之萬物將自賓天地相合以降甘露民莫
之令而自均始制有名名亦既有夫亦將知止知止218-167-17-226.dynamic.hinet.net海
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作者 pent.bbs@bbs.ccns.ncku.edu.tw (.), 看板 Biotech
標題 Re: 請教一個問題 DAPI
時間 夢之大地 (Wed Jan 19 01:09:28 2005)
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除了亮之外,
請問你們是在100x底下數嗎?
我覺得100x不是看的很清楚，到底是幾個菌發出一個亮點
and 被染的細菌是不是呈現白色亮點??
請問，有誰知到那個網站有明確的DAPI染色後的照片呢?
我是染細菌的
我有用google找過了
THX
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作者 pent.bbs@bbs.ccns.ncku.edu.tw (.), 看板 Biotech
標題 Re: 請教一個問題 DAPI
時間 夢之大地 (Wed Jan 19 01:17:51 2005)
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我們不是用UV喔
我也不太清楚那到底是啥光，只知叫螢光，似乎是藍色的
一般光源 的話 似乎看不到啥，只看到一片黃色的亮光
因為我的sample沒用蓋玻片 100x可以看到背景呈現水藍色
超過100x連背景都變成一片灰暗
還有之前有人建議我用油鏡
油鏡的目的是不是要避免水對光線造成的折射??
我想試試看
其實我只是個對生化實驗有興趣的工讀生
所以我對研究室內的配備不是說很清楚
而老闆是一個想從地球科學轉跳生化實驗
所以他也是一知半解
助理在我進來後已經換了兩個，交接沒做好
配備和用法現任的也不清楚 orz
其實我已經對這實驗室失望
但希望專注的研究DAPI的作法
最少讓老闆看到自己還有在做事 唉唉~
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※ Origin: <bbs.ccns.ncku.edu.tw> ◆ From: 140.116.103.98
推 oplz:最快的方法, 去別間lab學..會比較快且有用 134.174.178.197 01/19
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作者 KaurJmeb (維基百科見習編輯) 看板 Biotech
標題 Re: 請教一個問題 DAPI
時間 Wed Jan 19 19:23:36 2005
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※ 引述《pent.bbs@bbs.ccns.ncku.edu.tw (.)》之銘言：
: 我們不是用UV喔
: 我也不太清楚那到底是啥光，只知叫螢光，似乎是藍色的
一般光學顯微鏡配的都是水銀燈(汞燈，mercury lamp)，有些實驗室會配氙氣燈，
水銀燈的光譜上，在某些波長有明顯的peak，
因此在實驗上，才會利用水銀燈的這項特點，
研發出不同的染劑，提供學術研究。
DAPI這個染劑，可以用UV激發，
而汞燈的光譜上，UV波長附近也有peak，
所以用汞燈也可以激發DAPI。
: 油鏡的目的是不是要避免水對光線造成的折射??
: 我想試試看
所以你之前沒有用油鏡油嗎？
如果沒有，肯定會模糊一片的。
至於使用油鏡油的目的，是因為光學上resolution的問題(是翻作解析力嗎？)
解析力意味著顯微鏡分辨兩點最小距離的能力
公式是：Ｒ＝λ／２ＮＡ
（λ：光的波長；ＮＡ是物鏡的孔徑值＝ｎ × ｓｉｎα，n：介質折射率；α：光線
入射角最大值的一半）
空氣的n是１，油鏡油的n約是１.５１５。
有興趣的人可以自己算算看。
但是不是每一顆物鏡都能適用油鏡油，
只有物鏡上寫有「Oil」的才能用。
（如果非油鏡物鏡沾到油，請儘快清乾淨，因為油鏡油對物鏡會有傷害）
另外，油鏡油也有分螢光用和穿透光用，
差別是在螢光用的油，有避免掉油的自發螢光這個問題。
: 但希望專注的研究DAPI的作法
: 最少讓老闆看到自己還有在做事 唉唉~
和前面的版友建議相似，
可以直接找有相關技術的實驗室幫忙，
看你的來源站，猜測你可能是成大的學生，
生科領域的研究很好，你應該不難找到幫助你的人。
另外，看你上一篇文章，你實驗的對象好像是細菌，
我以前做的是細胞，所以圖方面應該無法給你實質幫助，
不過你可以上網找找有沒有相關實驗的paper，裡面可能有圖可以參考。
或者是，你可以把你的protocol寫上來，
大家也好就你實驗的流程給你一點意見。
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結果還是上網找到了一篇有圖的PAPER
http://aem.asm.org/cgi/reprint/63/4/1564.pdf
請慢用
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 218.35.20.159
→ KaurJmeb:忘了講 油鏡油請找賣你顯微鏡的公司買 218.35.20.159 01/19
→ KaurJmeb:大家設計的油都只最適自己的物鏡...... 218.35.20.159 01/19
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作者 pent.bbs@bbs.ccns.ncku.edu.tw (牢籠中的眼睛), 看板 Biotech
標題 Re: 請教一個問題 DAPI
時間 夢之大地 (Fri Jan 21 14:22:07 2005)
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多謝指教
我附我的拍的圖片 和 我們實驗室的 protocol
希望大家能教教我
protocol http://140.116.5.200/~i3492116/501~507.ppt
照片 http://140.116.5.200/~i3492116/Q124.JPG 請問
推 oplz:一樣的建議 去別間 Lab 找人學是最快也最 134.174.178.197 01/22
→ oplz:好的方法... 134.174.178.197 01/22