推 aggaci:也許你該說一下你是怎麼凍細胞的 140.114.63.11 07/10
推 YuChHa:autophage了喔?? 140.112.121.97 07/10
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作者: cubs (棉花糖...) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 細胞培養問題
時間: Mon Jul 11 01:14:57 2005
※ 引述《Tinmon (芭樂)》之銘言：
: 我的細胞株自從解凍之後
: 細胞存活率應該是有六成
: 但後來細胞質會開始出現許多小空泡
: 只要一經過subculture之後
: 細胞就會愈來愈少最後全死光
: 有人遇到這種情況嗎?
我記得我以前也有類似的情形
我覺得應該是凍細胞的時候沒凍好
以前記得有個學張跟我說,細胞出現小空泡有可能是細胞autophage了
所以...
再解凍另外一管看看吧.
--
喜歡一個人是一種幸福,
這種幸福要好好的珍惜.
--
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◆ From: 59.112.87.86
推 SQRT:除了凍的方法外，也要注意凍的時候的細胞數 61.231.205.130 07/11
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作者: Tinmon (芭樂) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 細胞培養問題
時間: Mon Jul 11 17:42:36 2005
※ 引述《cubs (棉花糖...)》之銘言：
: ※ 引述《Tinmon (芭樂)》之銘言：
: : 我的細胞株自從解凍之後
: : 細胞存活率應該是有六成
: : 但後來細胞質會開始出現許多小空泡
: : 只要一經過subculture之後
: : 細胞就會愈來愈少最後全死光
: : 有人遇到這種情況嗎?
: 我記得我以前也有類似的情形
: 我覺得應該是凍細胞的時候沒凍好
: 以前記得有個學張跟我說,細胞出現小空泡有可能是細胞autophage了
: 所以...
: 再解凍另外一管看看吧.
那真糟糕
現在解凍的每一批都出現此現象
我用50%FBS和10%的DMSO凍細胞的
--
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◆ From: 140.112.84.82
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作者: YuChHa (山風冰凍我的心) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 細胞培養問題
時間: Mon Jul 11 18:03:00 2005
※ 引述《Tinmon (芭樂)》之銘言：
: 我的細胞株自從解凍之後
: 細胞存活率應該是有六成
: 但後來細胞質會開始出現許多小空泡
: 只要一經過subculture之後
: 細胞就會愈來愈少最後全死光
: 有人遇到這種情況嗎?
我不知道你在凍細胞的時候有沒有含血清?
但是我和你說
如果你在解凍細胞時會遇到這樣的情形
那我建議你以後凍細胞時用 80% 到全血清
最好是全血清
這樣可以防止解凍後的 autophage
雖然很貴很浪費
但是萬一細胞很重要
這樣做會比較好
像我以前在做 Stem Cell 時
用全血清更是 critical
希望這個小撇步對你有幫助
加油!!^^
--
最愛小嵐兒~~^_^~~
--
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◆ From: 140.112.121.97
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作者: YuChHa (山風冰凍我的心) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 細胞培養問題
時間: Mon Jul 11 18:05:16 2005
※ 引述《Tinmon (芭樂)》之銘言：
: ※ 引述《cubs (棉花糖...)》之銘言：
: : 我記得我以前也有類似的情形
: : 我覺得應該是凍細胞的時候沒凍好
: : 以前記得有個學張跟我說,細胞出現小空泡有可能是細胞autophage了
: : 所以...
: : 再解凍另外一管看看吧.
: 那真糟糕
: 現在解凍的每一批都出現此現象
: 我用50%FBS和10%的DMSO凍細胞的
解凍後
DMSO 要洗淨唷!!
不然很毒
會引起 apoptosis
--
最愛小嵐兒~~^_^~~
--
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◆ From: 140.112.121.97
※ 編輯: YuChHa 來自: 140.112.121.97 (07/11 18:06)
※ 編輯: YuChHa 來自: 140.112.121.97 (07/11 18:06)
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作者: souy (........) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 細胞培養問題
時間: Mon Jul 11 18:18:37 2005
※ 引述《YuChHa (山風冰凍我的心)》之銘言：
: ※ 引述《Tinmon (芭樂)》之銘言：
: : 我的細胞株自從解凍之後
: : 細胞存活率應該是有六成
: : 但後來細胞質會開始出現許多小空泡
: : 只要一經過subculture之後
: : 細胞就會愈來愈少最後全死光
: : 有人遇到這種情況嗎?
: 我不知道你在凍細胞的時候有沒有含血清?
: 但是我和你說
: 如果你在解凍細胞時會遇到這樣的情形
: 那我建議你以後凍細胞時用 80% 到全血清
: 最好是全血清
: 這樣可以防止解凍後的 autophage
: 雖然很貴很浪費
: 但是萬一細胞很重要
: 這樣做會比較好
: 像我以前在做 Stem Cell 時
: 用全血清更是 critical
: 希望這個小撇步對你有幫助
: 加油!!^^
而且血清加DMSO最好要凍細胞時現配
我之前就先把它配好 凍在-20度中 要用才取出來
結果那時凍的細胞存活率都很差~ 加油~
--
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◆ From: 140.129.71.207
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作者: YuChHa (山風冰凍我的心) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 細胞培養問題
時間: Mon Jul 11 19:09:21 2005
※ 引述《souy (........)》之銘言：
: ※ 引述《YuChHa (山風冰凍我的心)》之銘言：
: : 我不知道你在凍細胞的時候有沒有含血清?
: : 但是我和你說
: : 如果你在解凍細胞時會遇到這樣的情形
: : 那我建議你以後凍細胞時用 80% 到全血清
: : 最好是全血清
: : 這樣可以防止解凍後的 autophage
: : 雖然很貴很浪費
: : 但是萬一細胞很重要
: : 這樣做會比較好
: : 像我以前在做 Stem Cell 時
: : 用全血清更是 critical
: : 希望這個小撇步對你有幫助
: : 加油!!^^
: 而且血清加DMSO最好要凍細胞時現配
: 我之前就先把它配好 凍在-20度中 要用才取出來
: 結果那時凍的細胞存活率都很差~ 加油~
沒錯
一定要現配
DMSO主要是溶不溶於水的物質的有機溶液
放太久會破壞血清!!^^
--
最愛小嵐兒~~^_^~~
--
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◆ From: 140.112.121.97
※ 編輯: YuChHa 來自: 140.112.121.97 (07/11 19:11)
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作者: Tinmon (芭樂) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 細胞培養問題
時間: Mon Jul 11 23:37:07 2005
※ 引述《YuChHa (山風冰凍我的心)》之銘言：
: ※ 引述《souy (........)》之銘言：
: : 而且血清加DMSO最好要凍細胞時現配
: : 我之前就先把它配好 凍在-20度中 要用才取出來
: : 結果那時凍的細胞存活率都很差~ 加油~
: 沒錯
: 一定要現配
: DMSO主要是溶不溶於水的物質的有機溶液
: 放太久會破壞血清!!^^
謝謝大家熱情的解答
只是很好奇從食工所買來的細胞資料
我也問過他們
凍細胞用90% culture medium和10% DMSO
細胞解凍的存活率還是很高
為什麼自己凍細胞時已經提高到50%的FBS
DMSO也是要凍細胞之前才加
存活率還是這麼低
ㄧ但autophage的現象發生
就很難再救得回來了嗎?
--
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◆ From: 140.112.84.82
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: aggaci (挖拍狼喔!!) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 細胞培養問題
時間: Mon Jul 11 23:44:48 2005
※ 引述《Tinmon (芭樂)》之銘言：
: ※ 引述《YuChHa (山風冰凍我的心)》之銘言：
: : 沒錯
: : 一定要現配
: : DMSO主要是溶不溶於水的物質的有機溶液
: : 放太久會破壞血清!!^^
: 謝謝大家熱情的解答
: 只是很好奇從食工所買來的細胞資料
: 我也問過他們
: 凍細胞用90% culture medium和10% DMSO
: 細胞解凍的存活率還是很高
: 為什麼自己凍細胞時已經提高到50%的FBS
: DMSO也是要凍細胞之前才加
: 存活率還是這麼低
: ㄧ但autophage的現象發生
: 就很難再救得回來了嗎?
我認為不是血清多寡的問題
既然食工所她們都這麼說了....
也許你該提供依下你凍細胞流程...還有你養的是什麼細胞等...?
and..以血清 or medium 稀釋 DMSO不能馬上和細胞混何
因為會放熱....細胞會死翹翹
你要不要跟你學長姐商量依下
你解凍你學長的細胞, 你學長解凍你的細胞....
看看是哪邊出問題
--
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◆ From: 140.114.63.11
※ 編輯: aggaci 來自: 140.114.63.11 (07/11 23:47)
推 pshamrock:不能馬上混合? 那是要怎樣 我們都馬上混221.169.193.230 07/14
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作者: YuChHa (山風冰凍我的心) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 細胞培養問題
時間: Mon Jul 11 23:51:37 2005
※ 引述《aggaci (挖拍狼喔!!)》之銘言：
: ※ 引述《Tinmon (芭樂)》之銘言：
: : 謝謝大家熱情的解答
: : 只是很好奇從食工所買來的細胞資料
: : 我也問過他們
: : 凍細胞用90% culture medium和10% DMSO
: : 細胞解凍的存活率還是很高
: : 為什麼自己凍細胞時已經提高到50%的FBS
: : DMSO也是要凍細胞之前才加
: : 存活率還是這麼低
: : ㄧ但autophage的現象發生
: : 就很難再救得回來了嗎?
: 我認為不是血清多寡的問題
: 既然食工所她們都這麼說了....
: 也許你該提供依下你凍細胞流程...還有你養的是什麼細胞等...?
: and..以血清 or medium 稀釋 DMSO不能馬上和細胞混何
: 因為會放熱....細胞會死翹翹
: 你要不要跟你學長姐商量依下
: 你解凍你學長的細胞, 你學長解凍你的細胞....
: 看看是哪邊出問題
應該是你沒凍好
我是有先放 -20 一小時
再放 -80 overnight
最後隔天才放液態氮中
中間過程要快狠準!!
--
最愛小嵐兒~~^_^~~
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 59.121.133.212
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: YuChHa (山風冰凍我的心) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 細胞培養問題
時間: Tue Jul 12 00:01:22 2005
※ 引述《Tinmon (芭樂)》之銘言：
: ※ 引述《YuChHa (山風冰凍我的心)》之銘言：
: : 沒錯
: : 一定要現配
: : DMSO主要是溶不溶於水的物質的有機溶液
: : 放太久會破壞血清!!^^
: 謝謝大家熱情的解答
: 只是很好奇從食工所買來的細胞資料
: 我也問過他們
: 凍細胞用90% culture medium和10% DMSO
: 細胞解凍的存活率還是很高
: 為什麼自己凍細胞時已經提高到50%的FBS
: DMSO也是要凍細胞之前才加
: 存活率還是這麼低
: ㄧ但autophage的現象發生
: 就很難再救得回來了嗎?
這題目很 hot
搞不好你可以試試看唷!!^^
--
最愛小嵐兒~~^_^~~
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 59.121.133.212
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: fjubiology (Proposal結束) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 細胞培養問題
時間: Tue Jul 12 02:44:25 2005
※ 引述《YuChHa (山風冰凍我的心)》之銘言：
: ※ 引述《Tinmon (芭樂)》之銘言：
: : 謝謝大家熱情的解答
: : 只是很好奇從食工所買來的細胞資料
: : 我也問過他們
: : 凍細胞用90% culture medium和10% DMSO
: : 細胞解凍的存活率還是很高
: : 為什麼自己凍細胞時已經提高到50%的FBS
: : DMSO也是要凍細胞之前才加
: : 存活率還是這麼低
: : ㄧ但autophage的現象發生
: : 就很難再救得回來了嗎?
可以救回來，不過不建議閣下這麼作
: 這題目很 hot
: 搞不好你可以試試看唷!!^^
--
織田信長：「杜鵑不叫，我殺了牠！」
豐臣秀吉：「杜鵑不叫，我想辦法讓牠叫！」
德川家康：「杜鵑不叫，我等牠叫！」
Angus Tzeng：「杜鵑不叫，我自己叫！XD」
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 59.104.28.121
> -------------------------------------------------------------------------- <
發信人: jennychine.bbs@bbs.ccns.ncku.edu.tw (千千), 看板: Biotech
標 題: Re: [問題] 細胞培養問題
發信站: 夢之大地 (Wed Jul 13 12:53:48 2005)
轉信站: ptt!Group.NCTU!grouppost!Group.NCTU!Dream
※ 引述《fjubiology.bbs@ptt.cc (Proposal結束)》之銘言：
> ※ 引述《YuChHa (山風冰凍我的心)》之銘言：
> 可以救回來，不過不建議閣下這麼作
> : 這題目很 hot
> : 搞不好你可以試試看唷!!^^
不好意思~我是很新的新手~
可以幫我解釋一下...什麼autophage嗎??
謝謝喔 可以解釋一下 怎麼會發生這樣的現象阿??
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夢之大地 逼逼ㄟ四 █▁◤ █ █ █▁▁ █ █ ▉▉▉ █▁ █ █ █ █ █▁◤
※ Origin: <bbs.ccns.ncku.edu.tw> ◆ From: 218-175-158-174.dynamic.hinet.net
→ aggaci:autophage cell death..前幾年發現的, 特徵與 140.114.63.11 07/13
→ aggaci:apoptosis、necrosis不同的死亡方式 140.114.63.11 07/13
推 Bcl2:國內有cell growth/death的lab在做這個嗎? 218.166.84.67 07/19
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作者: evilest (地球太危險了…) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 細胞培養問題
時間: Wed Jul 13 16:43:37 2005
※ 引述《Tinmon (芭樂)》之銘言：
: 我的細胞株自從解凍之後
: 細胞存活率應該是有六成
: 但後來細胞質會開始出現許多小空泡
: 只要一經過subculture之後
: 細胞就會愈來愈少最後全死光
: 有人遇到這種情況嗎?
一個小密訣
理論上，細胞從液態氮移出快速解凍後，
細胞是處於虛弱狀態
需要給它最好的環境
而好環境不在於你給他多少FBS，
而是在於細胞密度
解凍出來的細胞密度愈低，存活率愈高
依我最近幾次的測試，細胞存活率約在七八成(細胞沉降後的存活率)，
最高可達九成(約10倍稀釋量)
給你參考一下吧~~
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.79.172
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: Bcl2 (Tannhauser) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 細胞培養問題
時間: Tue Jul 19 22:14:23 2005
※ 引述《evilest (地球太危險了…)》之銘言：
: 細胞是處於虛弱狀態
: 需要給它最好的環境
: 而好環境不在於你給他多少FBS，
: 而是在於細胞密度
: 解凍出來的細胞密度愈低，存活率愈高
: 依我最近幾次的測試，細胞存活率約在七八成(細胞沉降後的存活率)，
: 最高可達九成(約10倍稀釋量)
: 給你參考一下吧~~
那請問您是怎樣拿捏的?
還有用的細胞是adhesion還是suspension?
因為就個人經驗(adhesion)
Density如果太低
Growth retardation很明顯 必須靠血清增量才勉強抵銷
--
台灣錦繡江山誰是主人翁?
我們兩千萬同胞!
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◆ From: 203.71.87.1
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作者: evilest (地球太危險了…) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 細胞培養問題
時間: Wed Jul 20 08:49:51 2005
※ 引述《Bcl2 (Tannhauser)》之銘言：
: ※ 引述《evilest (地球太危險了…)》之銘言：
: : 細胞是處於虛弱狀態
: : 需要給它最好的環境
: : 而好環境不在於你給他多少FBS，
: : 而是在於細胞密度
: : 解凍出來的細胞密度愈低，存活率愈高
: : 依我最近幾次的測試，細胞存活率約在七八成(細胞沉降後的存活率)，
: : 最高可達九成(約10倍稀釋量)
: : 給你參考一下吧~~
: 那請問您是怎樣拿捏的?
: 還有用的細胞是adhesion還是suspension?
adhesion，小鼠骨髓瘤細胞
: 因為就個人經驗(adhesion)
: Density如果太低
: Growth retardation很明顯 必須靠血清增量才勉強抵銷
我test的不夠多，還沒遇到你說的growth retardation
等我做了比較詳細的實驗，再寫出來和大家分享唄~
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◆ From: 140.112.25.186