我之前 題目是在觀查血液幹細胞和osteoblast 的關係，
所以我對於骨髓和endosteum 的完整也必需要求。
這是沒辦法的事，我發現只有fresh bone section ，
就是骨頭取出來之後就立刻包埋切片，un-fixed, un-decalcified ，
唯有這樣，骨髓和endosteum 才不會分家。
至於到底是calcified 還是fixative 造成這種分家的問題，我也不很清楚。
也有可能是dehydration 的步驟造成的。
一般paraffin section 製備，也有酒精脫水，若是frozen 也有用sucrose 不是嗎！
我後來通通都免去了。
一般prepare 的方法，有些人覺得這樣沒問題，但是在我手上就很麻煩，
就算我不理會分家的問題，那些CD marker 還是會被formalin-based fixative 殺光。
膠帶法正式應稱做Tape-traner method，
有兩家在賣這種東西
http://www.instrumedics.com/cryojane.htm
另外一家是日本廠的，叫Section-lab 也有賣。
是的，要花一點錢，膠帶法配合鎢碳鋼刀及刀座(Leica 機台)，
在台灣兩個一起買要約18萬。
本來不想花錢，我還去超市自己買了一堆各式膠帶，最後還是花錢消災。
但是用了之後效果好很多，immunostain 時也不需要什麼前處理。
如果您身旁有牙科或骨科的話，他們實驗室也許會有這些東西。
希望對您有幫助。
※ 引述《hchung (hiflypig)》之銘言：
: ※ 引述《DouglasT (sdf)》之銘言：
: : 我也做過一些bone section immunostain，
: : 我也碰過你的問題，而且殘存的section 就算有染上，也不能照相。
: : 我沒真的測試過，但我覺得很多CD marker 對福馬林類的fix 都很不耐，
: : 就算antigen retrieval 沒掉片也染不出來。
: : 我後來用frozen section，同時參考別的paper 用膠帶法，掉片的問題就解決了。
: : 同時我也不用福馬林類做fix ，是採用fresh bone secton，
: : 在染之前用EtOH 或Acetone 短暫fix ，很多染不出來的CD marker 都活回來了，
: : 不是CD marker 的antigen 他們的intensity 也會變強，
: : 效果顯著。
: : 你可以參考一下。
: 又多了一個人來討論這個困擾人的問題了~XD
: 進入主題!!
: 想請問你是觀察骨頭的哪個部份呢?
: 我之前有嘗試過frozen section，就是用OCT包埋切片，不過這樣的方法，會發現
: 我要觀察的細胞，osteoblast跟osteoclast都脫離我的骨頭表面，就是會漂到
: bone marrow 中間，如果這樣以形態來說，就會變的沒有說服力，後來我們才用
: paraffin section。
: 另外想請問你，使用fresh bone section的話，是直接將骨頭取下，不灌流固定，
: 直接切片，那這樣的話刀片不就要用鋼刀之類的刀片。>""<
: 還有就是膠帶法~第一次聽到這樣的方法，可以跟我說一下這是什麼方法嗎?
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