[問題] 那有人用過lipofectamine2000嗎?? Invitrogen出的

[komu (I'm loving it~)]

看到上一篇討論transfection的文章
覺得這裡的專家真的好多優

想請問一下

我們實驗室之前用的都是lipofectamine
最近聽別人的建議換成lipofectamine2000

但是我和學長試過的感覺  細胞死的好多 (真的好多阿)

可以請做過的人提供依下步驟或是意見嗎???


謝謝~~~

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◆ From: 140.129.78.136
推 citrinin:是很毒沒錯啊
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 作者  HIbaby (嗨北鼻)                                      看板  Biotech     
 標題  Re: [問題] 那有人用過lipofectamine2000嗎?? Inv …                      
 時間  Thu Nov  4 23:40:02 2004                                               
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我們實驗室也有人用這個系統..
(話說回來 我們實驗室每個人的實驗方法都不同 真奇怪. -_-)
我是沒看過說明書
不過他們說是要到細胞長滿的時候
才進行transfection
和一般要求60%--80%左右有所不一樣.
也許狠毒吧

最近有測試另一個kit 是promega的Fugene?(不知有沒拼錯）
聽說效果還不錯
不過不是我在做
不知道哪為板友有用過..:)
                                  
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◆ From: 219.1.156.27           
> --------------------------------------------------------------------------- <
 作者  blence (       )                                     看板  Biotech     
 標題  Re: [問題] 那有人用過lipofectamine2000嗎?? Inv …                      
 時間  Thu Nov  4 23:47:49 2004                                               
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※ 引述《komu (I'm loving it~)》之銘言：
: 看到上一篇討論transfection的文章
: 覺得這裡的專家真的好多優
: 想請問一下
: 我們實驗室之前用的都是lipofectamine
: 最近聽別人的建議換成lipofectamine2000
: 但是我和學長試過的感覺  細胞死的好多 (真的好多阿)
: 可以請做過的人提供依下步驟或是意見嗎???
: 謝謝~~~


   我們一直都是用2000的
   主要的原因是不必serum-free、不用wash、而且效率又高
   不過我們lab也遇到細胞死亡的問題

   我們試過的減少細胞死亡的方式
   1.降低2000的用量（60mm dish用量不超過10ul）
   2.提高cell confluence到90%~95%        
   3.若是送plasmid，配合plasmid的量調整2000的用量
     plasmid較小，則可以用到1:1~1.5
     若plasmid有點大（>10kb），可能要高一點1:4~5

   當然不是每一種細胞都適用2000（參見invitrogen catalog）
   總之2000效率頗高、但毒性大、價錢也高
   能省用就盡量省用


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   以前invitrogen網站是有提供一個cell database
   可供查詢哪些paper使用了invitrogen的reagent
   但是現在好像無法連結了

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   Roche的Fugene系列也有類似的database
   可惜沒試用過

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◆ From: 61.31.145.125
推 OSM:哈 我把fugene搞錯家了..