[問題]請問有人是在養U937嗎

[flypoo (不知道)]

最近去跟別實驗室解凍了一管來養
本來以為它們會很貼
結果貼的很少 大部份都是飄的
本來是用FLASK 但是發現用DISH會比較貼
我是用RPMI養 CO2是5%
我已經養兩個星期了
每次離心 細胞好像都有多一點點 但就那麼一點點
一直長不起來的感覺
而且 可能因為之前有死 所以離心下來也有好多髒髒的屑屑
都無法清掉
請問是不是要加什麼 才能讓它們長的比較好呢
請有經驗的大大幫個忙吧 剛溫呦!



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◆ From: 140.109.40.20
推 aggaci:U937不是本來就是suspension的嗎?
推 ghjkl:對阿U937不是懸浮的monocyte嗎會貼才有問題吧
推 datro:MEDIUM有時候也是問題 聽說很挑 Sigma的medium確定不行
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作者: trxcnchen (小老百姓) 看板: Biotech
標題: Re: [問題]請問有人是在養U937嗎
時間: Mon Jan 23 19:06:26 2006

※ 引述《flypoo (不知道)》之銘言：
: 最近去跟別實驗室解凍了一管來養
: 本來以為它們會很貼
: 結果貼的很少 大部份都是飄的
: 本來是用FLASK 但是發現用DISH會比較貼
: 我是用RPMI養 CO2是5%
: 我已經養兩個星期了
: 每次離心 細胞好像都有多一點點 但就那麼一點點
: 一直長不起來的感覺
: 而且 可能因為之前有死 所以離心下來也有好多髒髒的屑屑
: 都無法清掉
: 請問是不是要加什麼 才能讓它們長的比較好呢
: 請有經驗的大大幫個忙吧 剛溫呦!


    U937是 human monocyte 的 cell line
    growth property 本來就是 suspension
    不貼才是正常
    除非加藥去活化才會貼
    只有RPMI+10%FBS是不會貼的
    另外, U937長的很快

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作者: stonegirl (Girls, be ambitious) 看板: Biotech
標題: Re: [問題]請問有人是在養U937嗎
時間: Tue Jan 24 02:14:18 2006

※ 引述《flypoo (不知道)》之銘言：
: 最近去跟別實驗室解凍了一管來養
: 本來以為它們會很貼
: 結果貼的很少 大部份都是飄的
: 本來是用FLASK 但是發現用DISH會比較貼
: 我是用RPMI養 CO2是5%
: 我已經養兩個星期了
: 每次離心 細胞好像都有多一點點 但就那麼一點點
: 一直長不起來的感覺
: 而且 可能因為之前有死 所以離心下來也有好多髒髒的屑屑
: 都無法清掉
: 請問是不是要加什麼 才能讓它們長的比較好呢
: 請有經驗的大大幫個忙吧 剛溫呦!

  本來就是suspension (前面有人提過了)
  建議剛解凍開始養的時候cell density可以比建議的高出許多
  剛開始繼代時不用離心   直接用稀釋的
  (ex:原本有5ml的細胞    可以加入5ml的新鮮medium)
  另外   RPMI裡面有加HEPES會長的比較好喔(條件請參照ATCC)
  大致上就是這樣
  一開始養好了  後面proliferation的速度會讓你覺得怎麼可以這麼快....

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推 aggaci:其實HL-60也是這樣...