推 hkaiwei:有沒有PAGE可以看一下? 03/02 23:36
推 deathscytheX:你elute buffer是在PBS還是Tris?? 03/02 23:57
推 bee:還有一個可能是蛋白沒吸上 03/03 00:24
推 rita1986:回2樓的~~是PBS裡 沒抓到蛋白 到底哪出問題??? 03/03 01:27
推 NKTcell:問題應該在lysis buffer的成分 另一方面 如果運氣夠差的話 03/03 01:38
→ NKTcell:有的蛋白就是抓不下來 即使有被induce出來 這是很弔詭的 03/03 01:39
推 Bluecold:GSH-shepharose是怎麼equibriment的? 如果只用2Xbuffer 03/03 04:06
→ Bluecold:可能不太夠 建議用10x或是20X左右equibriment 03/03 04:07
推 rita1986:X是我洗的次數 2X就是說6ml PBS洗兩次 03/03 12:02
→ rita1986:樓上的前輩是說要洗個10到20次體積的PBS 03/03 12:05
推 cyken:可能是lysis buf的問題,把flow thru和wash出來的都拿去跑膠 03/03 12:10
推 turtledodoha:如果你的protein沒有要在進一步的purify或與其他 03/03 22:11
→ turtledodoha:protein interaction，你可以直接加適量的SDS sample 03/03 22:12
→ turtledodoha:buffer去煮，跑SDS-PAGE來check 03/03 22:13
→ turtledodoha:是否有在2h內binding成功，wash後的上清液也可以確認 03/03 22:14
推 deathscytheX:沒抓到蛋白?所以拿Sepharose去loading也沒有protein? 03/04 01:45
推 rita1986:謝謝各位的解答 ^^~ 絕定先把triton改lysozyme破菌試試看 03/04 13:04