[問題] western blotting 收細胞方法

[cuteball (加油唷)]

請問一下大家都用刮的還是用trypsin打下來 這樣跑出來的結果會有差嗎?

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 61.31.137.63

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作者: baby1312 (唷呼) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] western blotting  收細胞方法
時間: Mon Mar 28 01:40:09 2005

※ 引述《cuteball (加油唷)》之銘言：
: 請問一下大家都用刮的還是用trypsin打下來 這樣跑出來的結果會有差嗎?
我個人的結果是沒有差
不過用刮的有些細胞貼很緊
會刮不太下來
可能收集到的細胞數就不夠
我看過有先用TRYPSIN再用刮的
一網打盡喔~~

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有空多交流嘿...
http://home.pchome.com.tw/personal/baby1312/

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 218.169.58.210

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發信人: [e-mail] (恰北北), 看板: Biotech
標  題: Re: [問題] western blotting  收細胞方法
發信站: Perl (Mon Mar 28 09:35:10 2005)
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※ 引述《[e-mail] (唷呼)》之銘言：
: ※ 引述《cuteball (加油唷)》之銘言：
: : 請問一下大家都用刮的還是用trypsin打下來 這樣跑出來的結果會有差嗎?
: 我個人的結果是沒有差
: 不過用刮的有些細胞貼很緊
: 會刮不太下來
: 可能收集到的細胞數就不夠
: 我看過有先用TRYPSIN再用刮的
: 一網打盡喔~~

 我們是用trypsin打下來 在用刮的
 可是trypsin不要作用太久(會傷細胞)
 我也覺得沒差 又搞剛^^

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  ╩ｅｒｌ  蔚藍海岸 perl.tcu.edu.tw (203.64.80.217)


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作者: kismet (Lydia) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] western blotting  收細胞方法
時間: Thu Mar 31 20:30:47 2005

※ 引述《cuteball (加油唷)》之銘言：
: 請問一下大家都用刮的還是用trypsin打下來 這樣跑出來的結果會有差嗎?


      如果不想浪費trypsin就用刮的.....
      如果有部分細胞是還要subculture繼續養  我就會用trypsin
      如果細胞是全部都要拿來跑 western.....我會用刮的.....


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◆ From: 218.166.211.203

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發信人: [e-mail] (雷古多 呼), 看板: Biotech
標  題: Re: [問題] western blotting  收細胞方法
發信站: 夢之大地 (Sat Apr 16 17:57:06 2005)
轉信站: ptt!Group.NCTU!grouppost!Group.NCTU!Dream

之前我們學姊是說
因為是要跑WESTERN 就是要把細胞打破
所以我們都是typsin作用一下之後
再用刮的 反正收乾淨就對了..

※ 引述《[e-mail] (恰北北)》之銘言：
> ※ 引述《[e-mail] (唷呼)》之銘言：
> : 我個人的結果是沒有差
> : 不過用刮的有些細胞貼很緊
> : 會刮不太下來
> : 可能收集到的細胞數就不夠
> : 我看過有先用TRYPSIN再用刮的
> : 一網打盡喔~~
>  我們是用trypsin打下來 在用刮的
>  可是trypsin不要作用太久(會傷細胞)
>  我也覺得沒差 又搞剛^^

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夢之大地 逼逼ㄟ四 █▁◤ █  █ █▁▁ █  █ ▉▉▉ █▁ █  █ █  █ █▁◤ 
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作者: saviora (颶風之翼) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] western blotting  收細胞方法
時間: Sat Apr 16 18:57:04 2005

※ 引述《[e-mail] (雷古多 呼)》之銘言：
: 之前我們學姊是說
: 因為是要跑WESTERN 就是要把細胞打破
: 所以我們都是typsin作用一下之後
: 再用刮的 反正收乾淨就對了..
: ※ 引述《[e-mail] (恰北北)》之銘言：
: >  我們是用trypsin打下來 在用刮的
: >  可是trypsin不要作用太久(會傷細胞)
: >  我也覺得沒差 又搞剛^^
:
請問可以請教一個問題嗎

如果細胞破裂 那裡面的protein要怎麼抵抗trypsin

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 218.175.173.164
推 aggaci:打破細胞前  總得先離心吧?
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作者: HIbaby (嗨北鼻) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] western blotting  收細胞方法
時間: Sat Apr 16 20:32:55 2005


※ 引述《saviora (颶風之翼)》之銘言：
: ※ 引述《[e-mail] (雷古多 呼)》之銘言：
: : 之前我們學姊是說
: : 因為是要跑WESTERN 就是要把細胞打破
: : 所以我們都是typsin作用一下之後
: : 再用刮的 反正收乾淨就對了..
: 請問可以請教一個問題嗎
: 如果細胞破裂 那裡面的protein要怎麼抵抗trypsin


   我門實驗室會用含1%血清的PBS洗過 用trypsin回收下來的細胞
   在進行細胞的lysis

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發信人: [e-mail] (boulevard ), 看板: Biotech
標  題: Re: [問題] western blotting  收細胞方法
發信站: 不良牛牧場 (Sat Apr 16 21:04:37 2005)
轉信站: ptt!Group.NCTU!grouppost!Group.NCTU!SimFarm

請教一下加入1%serum的作用

新手上路^^

多謝

※ 引述《[e-mail] (嗨北鼻)》之銘言：
: ※ 引述《saviora (颶風之翼)》之銘言：
: : 請問可以請教一個問題嗎
: : 如果細胞破裂 那裡面的protein要怎麼抵抗trypsin
:    我門實驗室會用含1%血清的PBS洗過 用trypsin回收下來的細胞
:    在進行細胞的lysis

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   你是巨大的海洋 我是雨下在妳身上 我失去自己的形狀 我看到遠方 愛情的模樣
   曾經孤單的徬徨 曾經相信曾經失望 妳穿過重重的迷惘 那愛的慌張 終於要解放
 你是誰 教我狂戀 教我勇敢地挑戰全世界 在一樣的身體裡面 一樣有愛與被愛的感覺
 我愛誰 已無所謂 沒有誰能將愛情劃界限 在一樣地身體裡面 迷樣的魔力卻是更強烈
 星星在夜空中閃亮 星空下我不停流浪 此生我無知的奔忙 因為你眼光 都化成了光亮
  這世界全部的漂亮 不過妳可愛的模樣 妳讓我舉雙手投降 跨出了城牆 長出了翅膀

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推 pshamrock:那個目的應該是為了讓細胞稍微有點養分
→ pshamrock:但是感覺起來很多餘 一般跑FLOW才會這樣做
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發信人: [e-mail] (真悠閒), 看板: Biotech
標  題: Re: [問題] western blotting  收細胞方法
發信站: 無名小站 (Sat Apr 16 23:24:07 2005)
轉信站: ptt!Group.NCTU!grouppost!Group.NCTU!wretch

是不是FBS裡面有trypsin inhibitor的關係啊

※ 引述《[e-mail] (boulevard )》之銘言：
> 請教一下加入1%serum的作用
> 新手上路^^
> 多謝
> ※ 引述《[e-mail] (嗨北鼻)》之銘言：
> :    我門實驗室會用含1%血清的PBS洗過 用trypsin回收下來的細胞
> :    在進行細胞的lysis
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夫兵者不祥之器物或惡之故有道者不處君子居則貴左用兵則貴右兵者不祥之器非君子
之器不得已BLOG http://www.wretch.cc/blog 安西教練 我想寫日記 嗚嗚o志於天下
矣吉事尚左凶事尚右偏將軍居左上將軍居右言以喪禮處之殺人之眾以哀悲泣之戰勝以
喪禮處之道常無名樸雖小天下莫能臣侯王若能守之萬物將自賓天地相合以降甘露民莫
之令而自均始制有名名亦既有夫 61-62-168-171-adsl-tai.STATIC.so-net.net.tw海