推 Lipaty:stripping不完全。 218.167.54.144 06/17
推 vacule:拿片子的時候有沒有晃到 因為tubulin很強 140.112.133.48 06/17
推 apa9394:沒圖沒真相~~來張圖看看再來過~~ 61.231.58.78 06/18
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發信人: gilchang.bbs@bbs.wretch.cc (到頭來只是個墻外行人), 看板: Biotech
標 題: Re: [問題] 救命呀~~~~
發信站: 無名小站 (Sat Jun 18 00:25:53 2005)
轉信站: ptt!Group.NCTU!grouppost!Group.NCTU!wretch
※ 引述《ligase.bbs@ptt.cc (真的不是距離嗎)》之銘言：
> Western blot
> stripping之後 hybridize anti-alpha tubulin
你確定你用的是anti-alpha tubulin，哪個牌子的哪號產品?
而不是tubulin cocktail antibodies?
通常cocktail Abs是認alpha/beta兩條
如果是這個，那就有點符合你說的兩個位置:
alpha (~57 kDa)/beta (~55 k/Da)
這樣的話是正常的。
如果不是，那會不會是cross reacted band? 或是不同批的antibodies?
不過現在應該不會有廠商要賣這種砸招牌的antibody吧
> 剛去壓片出來後 竟然跑出兩條band
> 在55和55上方一點點的位子 共兩條
> 請問這是正常的嗎
> 那為什麼會有兩條band的產生??
> 還有 有人有跑過兩條band過嗎
> 我之前用同樣的方式 可是壓片出來只有一條band
> 為什麼這次會跑出兩條呢
> 不好意思 拜託各位幫幫我解答這些問題吧
> 謝謝
--
夫兵者不祥之器物或惡之故有道者不處君子居則貴左用兵則貴右兵者不祥之器非君子
之器不得已BBS telnet://bbs.wretch.cc 開個人板 超快 不用連署不可得志於天下
矣吉事尚左凶事尚右偏將軍居左上將軍居右言以喪禮處之殺人之眾以哀悲泣之戰勝以
喪禮處之道常無名樸雖小天下莫能臣侯王若能守之萬物將自賓天地相合以降甘露民莫
之令而自均始制有名名亦既有夫亦將知止知止可以不殆譬道之在天 140.109.40.39海
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作者: ligase (真的不是距離嗎) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 救命呀~~~~
時間: Sat Jun 18 02:38:28 2005
※ 引述《gilchang.bbs@bbs.wretch.cc (到頭來只是個墻外行人)》之銘言：
: ※ 引述《ligase.bbs@ptt.cc (真的不是距離嗎)》之銘言：
: > Western blot
: > stripping之後 hybridize anti-alpha tubulin
: 你確定你用的是anti-alpha tubulin，哪個牌子的哪號產品?
我確定
是sigma的
今天有再次去查過data sheet
: 而不是tubulin cocktail antibodies?
: 通常cocktail Abs是認alpha/beta兩條
: 如果是這個，那就有點符合你說的兩個位置:
: alpha (~57 kDa)/beta (~55 k/Da)
: 這樣的話是正常的。
: 如果不是，那會不會是cross reacted band? 或是不同批的antibodies?
: 不過現在應該不會有廠商要賣這種砸招牌的antibody吧
我上次做 用同樣的 antibody
只有一條band產生
另外
如果是stripping的問題
原本55KD附近 在第一次壓片時 並沒有什麼band
這樣stripping過後 會有機會產生很sharp的major band嗎
再來 也不可能是片子晃到的問題
因為我有注意這一點
而且我連續壓了六張片子
皆產生一樣的pattern
我實在想不出來還有什麼可能性會造成兩條band..><
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 192.192.228.178
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作者: yadayada (小羊羹) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 救命呀~~~~
時間: Wed Jun 22 07:43:43 2005
※ 引述《ligase (真的不是距離嗎)》之銘言：
: ※ 引述《gilchang.bbs@bbs.wretch.cc (到頭來只是個墻外行人)》之銘言：
: : 你確定你用的是anti-alpha tubulin，哪個牌子的哪號產品?
: 我確定
: 是sigma的
: 今天有再次去查過data sheet
: : 而不是tubulin cocktail antibodies?
: : 通常cocktail Abs是認alpha/beta兩條
: : 如果是這個，那就有點符合你說的兩個位置:
: : alpha (~57 kDa)/beta (~55 k/Da)
: : 這樣的話是正常的。
: : 如果不是，那會不會是cross reacted band? 或是不同批的antibodies?
: : 不過現在應該不會有廠商要賣這種砸招牌的antibody吧
: 我上次做 用同樣的 antibody
: 只有一條band產生
: 另外
: 如果是stripping的問題
: 原本55KD附近 在第一次壓片時 並沒有什麼band
: 這樣stripping過後 會有機會產生很sharp的major band嗎
: 再來 也不可能是片子晃到的問題
: 因為我有注意這一點
: 而且我連續壓了六張片子
: 皆產生一樣的pattern
: 我實在想不出來還有什麼可能性會造成兩條band..><
有沒有可能是 Peotein Sample degraded 了 ?
e.g. 沒有放冰上....etc
用個以前跑沒問題的sample當個control吧!!
good luck~~
--
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◆ From: 140.254.104.39
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標 題: Re: [問題] 救命呀~~~~
發信站: 批踢踢參 (Wed Jun 22 10:34:24 2005)
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※ 引述《ligase.bbs@ptt.cc (真的不是距離嗎)》之銘言：
: Western blot
: stripping之後 hybridize anti-alpha tubulin
: 剛去壓片出來後 竟然跑出兩條band
: 在55和55上方一點點的位子 共兩條
: 請問這是正常的嗎
: 那為什麼會有兩條band的產生??
: 還有 有人有跑過兩條band過嗎
: 我之前用同樣的方式 可是壓片出來只有一條band
: 為什麼這次會跑出兩條呢
: 不好意思 拜託各位幫幫我解答這些問題吧
: 謝謝
可能是 post-trnaslational modifications of tubulin
我覺得 hyper-acetylation of tubulin 可能是主要的原因
(當然 phosphorylaiotn, methylation, ubiquitination,
sumoylation, ADP-ribosylation ..... 都是可能的原因)
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標 題: Re: [問題] 救命呀~~~~
發信站: 批踢踢參 (Wed Jun 22 10:32:55 2005)
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※ 引述《yadayada.bbs@ptt.cc (小羊羹)》之銘言：
: 有沒有可能是 Peotein Sample degraded 了 ?
: e.g. 沒有放冰上....etc
: 用個以前跑沒問題的sample當個control吧!!
: good luck~~
我覺得 degradation of tubulin 的機會不大
因為看到的band MW.是在 55 kDa的上方 而不是在55 kDa以下
my 2 cents
--
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