推 apa9394:請問要如何重複使用,是要上別種1抗還是... 140.129.72.15 04/18
→ apa9394:那是要將1抗還是2抗strip下來... 140.129.72.15 04/18
推 dalimagasi:都要耶 且會上別種1抗及同一種1抗.....謝謝啦 140.109.40.44 04/18
推 aggaci:二樓的...兩種有差嗎~~?O.o可不可以分享一下140.114.100.165 04/18
推 apa9394:恩...我記得aggaci大您的方法可將1抗及2抗strip 140.129.72.15 04/18
→ apa9394:下來,而另一個版友的pH2.2 glycine是只能strip 140.129.72.15 04/18
→ apa9394:2抗,有paper佐證,要找一下.... 140.129.72.15 04/18
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作者: aggaci (五子棋啦) 看板: Biotech
標題: Re: 有關stripping的問題
時間: Mon Apr 18 17:23:06 2005
※ 引述《dalimagasi (不想養拉不拉多)》之銘言：
: 做完western後的membrane想要重覆使用,想要自行配stripping buffer
: 請問有人知道配方嗎 或者是哪本protocol有寫? 謝謝
0.5 ml 1M tris
2 ml 10% SDS
7.5 ml 二次水
--------------------以上是配一大瓶
每10 ml加0.75 micro-liter的beta-mercaptoethanol
於50度水浴30 min後 以TBST wash 1hr,再從blocking開始
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.100.165
※ 編輯: aggaci 來自: 140.114.100.165 (04/18 17:25)
> -------------------------------------------------------------------------- <
發信人: gilchang.bbs@bbs.wretch.cc (到頭來只是個墻外行人), 看板: Biotech
標 題: Re: 有關stripping的問題
發信站: 無名小站 (Mon Apr 18 21:57:09 2005)
轉信站: ptt!Group.NCTU!grouppost!Group.NCTU!wretch
※ 引述《aggaci.bbs@ptt.cc (五子棋啦)》之銘言：
> ※ 引述《dalimagasi (不想養拉不拉多)》之銘言：
> : 做完western後的membrane想要重覆使用,想要自行配stripping buffer
> : 請問有人知道配方嗎 或者是哪本protocol有寫? 謝謝
> 0.5 ml 1M tris
> 2 ml 10% SDS
> 7.5 ml 二次水
> --------------------以上是配一大瓶
> 每10 ml加0.75 micro-liter的beta-mercaptoethanol
> 於50度水浴30 min後 以TBST wash 1hr,再從blocking開始
-------------------------------------
alternative method:
(我們lab的...)
配方(200ml stripping buffer)
3g Glycine(s) (final: 1.5%)
dH2O 最後加到200ml
(調pH到2.2)
調完pH後加1ml 20% SDS (final: 0.1%)
2ml 10% Tween-20 (final: 0.1%)
做法:
membrane以TBST(or PBST)wash;
加適量stripping buffer, shaking, RT, ~45min;
wash with TBST (or PBST)
重覆以上步驟
再次blocking....
--------------------------------------
對了, 我們家多是處理cell lysate/extract....
--
夫兵者不祥之器物或惡之故有道者不處君子居則貴左用兵則貴右兵者不祥之器非君子
之器不得已相簿 http://www.wretch.cc/album 有佈景主題 速度很快 可得志於天下
矣吉事尚左凶事尚右偏將軍居左上將軍居右言以喪禮處之殺人之眾以哀悲泣之戰勝以
喪禮處之道常無名樸雖小天下莫能臣侯王若能守之萬物將自賓天地相合以降甘露民莫
之令而自均始制有名名亦既有夫亦將知止知止可以不殆譬道之在天 140.109.40.39海
推 dalimagasi:感恩 140.109.40.44 04/19
> -------------------------------------------------------------------------- <
發信人: rocksleep.bbs@bbs.wretch.cc (真悠閒), 看板: Biotech
標 題: Re: 有關stripping的問題
發信站: 無名小站 (Wed Apr 20 15:41:18 2005)
轉信站: ptt!Group.NCTU!grouppost!Group.NCTU!wretch
※ 引述《aggaci.bbs@ptt.cc (五子棋啦)》之銘言：
> ※ 引述《dalimagasi (不想養拉不拉多)》之銘言：
> : 做完western後的membrane想要重覆使用,想要自行配stripping buffer
> : 請問有人知道配方嗎 或者是哪本protocol有寫? 謝謝
> 0.5 ml 1M tris
> 2 ml 10% SDS
> 7.5 ml 二次水
> --------------------以上是配一大瓶
> 每10 ml加0.75 micro-liter的beta-mercaptoethanol
> 於50度水浴30 min後 以TBST wash 1hr,再從blocking開始
請問membrane泡在stripping buffer裡面要怎麼水浴阿
需要調pH值嗎
謝謝 謝謝
我覺得每次做WB每次丟真的好累也很煩人
--
夫兵者不祥之器物或惡之故有道者不處君子居則貴左用兵則貴右兵者不祥之器非君子
之器不得已相簿 http://www.wretch.cc/album 有佈景主題 速度很快 可得志於天下
矣吉事尚左凶事尚右偏將軍居左上將軍居右言以喪禮處之殺人之眾以哀悲泣之戰勝以
喪禮處之道常無名樸雖小天下莫能臣侯王若能守之萬物將自賓天地相合以降甘露民莫
之令而自均始制有名名亦既有夫亦 61-62-29-1-adsl-tai.DYNAMIC.so-net.net.tw海
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作者: aggaci (五子棋啦) 看板: Biotech
標題: Re: 有關stripping的問題
時間: Wed Apr 20 17:10:25 2005
※ 引述《rocksleep.bbs@bbs.wretch.cc (真悠閒)》之銘言：
: ※ 引述《aggaci.bbs@ptt.cc (五子棋啦)》之銘言：
: > 0.5 ml 1M tris
: > 2 ml 10% SDS
: > 7.5 ml 二次水
: > --------------------以上是配一大瓶
: > 每10 ml加0.75 micro-liter的beta-mercaptoethanol
: > 於50度水浴30 min後 以TBST wash 1hr,再從blocking開始
: 請問membrane泡在stripping buffer裡面要怎麼水浴阿
: 需要調pH值嗎
: 謝謝 謝謝
: 我覺得每次做WB每次丟真的好累也很煩人
用袋子封住....
WB算非常簡單了好嗎....有做過2D嗎?
做完2D 腿都軟了
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◆ From: 140.114.100.165
推 apa9394:水浴的時候要搖嗎? 140.129.72.15 04/20
推 aggaci:不用 丟下去就好摟~140.114.100.165 04/21
→ apa9394:謝~~ 140.129.72.15 04/21