推 ghjkl:你是濕式的還是半乾式的阿以前我都用掃描器掃起來 09/18 14:59
→ ghjkl:現在我都是直接利用照相的方式壓片所以已經沒有片子這東西了 09/18 15:00
※ 編輯: kerr 來自: 61.64.142.26 (09/18 19:49)
推 ZecAhau:Photoimager 09/18 21:05
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發信人: shiningspark.bbs@bbs.wretch.cc (), 看板: Biotech
標 題: Re: [問題] 關於western blotting
發信站: 無名小站 (Tue Sep 20 17:09:15 2005)
轉信站: ptt!Group.NCTU!grouppost!Group.NCTU!wretch
※ 引述《kerr.bbs@ptt.cc (追逐。。)》之銘言：
> 最近開始在try western blotting
> 想請問大家
> 如何決定transfer 的電流大小和時間
> 我參考了以前的人作的protocol <40kd, 是使用150mA, 45 min.
> 可是作了以後覺得連mraker都好淡
> 降子是不是transfer不夠啊??
transfer不夠的話
marker應該還會留在SDS PAGE上
下次可以留意看看
> 另外一個問題是
> 請問大家都是如何處理壓完的片？ 怎麼變成數位化保存?
> 我現在所能想到的辦法是 scan
> 不過有人說 這樣子效果不好
> 謝謝大家！
據說要選用負片掃描
不過我們家的scanner壞掉不能掃負片 只能掃反射稿
我的解決方法是放一張白紙在底片上
掃完以後把亮度跟對比提高
效果還可以
--
夫兵者不祥之器物或惡之故有道者不處君子居則貴左用兵則貴右兵者不祥之器非君子
之器不得已而用之恬淡為上勝而不美而美之者是樂殺人夫樂殺人者則不可得志於天下
矣吉事尚左凶事尚右偏將軍居左上將軍居右言以喪禮處之殺人之眾以哀悲泣之戰勝以
喪禮處之道常無名樸雖小天下莫能臣侯王若能守之萬物將自賓天地相合以降甘露民莫
之令而自均始制有名名亦既有夫亦將知止知止可以不殆labwsc4.life.nthu.edu.tw海
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作者: yy1126 (丫丫) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 關於western blotting
時間: Tue Sep 20 22:04:18 2005
※ 引述《shiningspark.bbs@bbs.wretch.cc ()》之銘言：
: ※ 引述《kerr.bbs@ptt.cc (追逐。。)》之銘言：
: > 最近開始在try western blotting
: > 想請問大家
: > 如何決定transfer 的電流大小和時間
: > 我參考了以前的人作的protocol <40kd, 是使用150mA, 45 min.
: > 可是作了以後覺得連mraker都好淡
: > 降子是不是transfer不夠啊??
: transfer不夠的話
: marker應該還會留在SDS PAGE上
: 下次可以留意看看
我最近也在try
試過了(4℃下)
100mA 840min ....因為是用reused的transfer buffer 所以marker也是很淡
90mA 760min ....結果不錯！因為是用新配buffer
僅有靠近上面的marker沒完全transfer過去
最慘的是(室溫下)
100v 70min ....欲速則不達....transfer出"愛心"....(可能是沒壓好吧？)
給大家笑笑....http://kuso.cc/7Ed
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哼！踩死你這個小人！
@#$%*~ /
︿○╯
（︿
〈 ♀ … ‥ ‥
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 220.137.0.188
推 sirius1980:不知道你的protein多大,我們家一般是跑15V,30min 09/20 22:32
→ ksksks:可翻molecular cloning裡頭有說電壓跟轉印面積成正比... 09/21 13:11