推 HAYATO:我想很少有人做過吧...不過striping掉再染是可以的 12/27 13:15
推 enisx:那請問在western時block的蛋白質會不會影響染色(尤其在銀染) 12/27 13:44
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作者: ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 請問2D電泳...
時間: Tue Dec 27 15:07:25 2005
※ 引述《enisx (.......................)》之銘言：
: 想請問各位
: 2D後的膠可以transfer到PVDFmembrane上接著作western blotting嗎?
: 再者 我的老闆要我試試看可不可以把作完western的這片membrane
: 把上面的Ab洗掉 然後用這片 membrane 再作銀染或 coomassie Blue染色
: (因為她想用同一片membrane去比對 western和 染色的結果,又覺得跑不同的兩
: 片2D 太浪費了..-_-)
: 我個人是感覺好像不行,但老板很堅持說一定可以!!!!(很確定的語氣!!!!)
: 所以想問問 各位高手是否有這樣的經驗可否指點小弟一二 謝謝大家了
我覺得不行
因為做western會用skim milk覆蓋nonspecific的蛋白
可是skim milk本身也是蛋白
所以小弟我猜就算是把western呈色後的Ab洗掉也無用了
用R-250或silver stain都會染成一整片吧?!
市面上還有其它染劑
例如Cy2、SyproRuby、VisPro等...
前兩者我沒用過，至於VisPro據說可以先把gel染色照相後再用acetate退染
這片膠還可以拿去做western
sales宣稱VisPro是negative stain(染acrylamide)，而且sensitivity到ng級
(就是染完後gel上有band的地方會變成透明，沒蛋白的acrylamide會變成白色)
所以不會影響後續的步驟，例如western或是N-ter sequencing等等...
以上純為推特，還請版上大大們指教 :)
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不過我個人用過VisPro的經驗是：怎麼染都染不到像catalog那樣漂亮 /___\~~~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.213.101
推 enisx:感謝您的回答!! 12/27 16:51
推 ROKEE:不過話說回來，跑一片2D成本不到400元..... 12/27 22:21
→ ROKEE:大概實驗室最不值錢的就是人力吧 /_\ 12/27 22:22
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發信人: hsd0.bbs@bbs.ym.edu.tw (恆星的恆心), 看板: Biotech
標 題: Re: [問題] 請問2D電泳...
發信站: 陽明大學神農坡資訊站 (Tue Dec 27 17:08:52 2005)
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> 把上面的Ab洗掉 然後用這片 membrane 再作銀染或 coomassie Blue染色
> (因為她想用同一片membrane去比對 western和 染色的結果,又覺得跑不同的兩
> 片2D 太浪費了..-_-)
> 我個人是感覺好像不行,但老板很堅持說一定可以!!!!(很確定的語氣!!!!)
> 所以想問問 各位高手是否有這樣的經驗可否指點小弟一二 謝謝大家了
用ponceau S 染吧 這樣就可以了 (如果protein量不少的話)
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勇氣的 Ella 陳嘉樺 ╔╦═╮╔╗ ╔╗ ╭══╮
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男孩子氣的Ella 個性獨立思想成熟 愛打籃球的她 更是「S.H.E女朋友」的隊長
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