[問題] SDS-PAGE stacking gel一直不凝

[chiasaiqueen (其實是水桶腰)]

 昨天我做片SDS-PAGE, seperating gel很快就凝了(約30 min)，
 然後做stacking gel的時候，卻死都不凝，做了4次，4次都一樣，
 甚至連well底都不凝，但是剩下來放在tube的卻全都凝了；
 我懷疑是沒有mix好，但是我做的步驟如下：
 加水、acrylamide/bis-acrylamids、tris buffer、SDS
 -> vortex, spin down
 ->加APS
 -> vortex, spin down
 ->加TEMED
 -> vortex, spin down

  我想應該不是reagent的問題，因為我seperating gel用的都是同樣的reagent，
  (除了tris buffer>
  而且tube裡的都凝了…

   請問版上的大大們有類似經驗嗎?可能是什麼問題?
   APS應該不會在一瞬間壞掉吧…
   以前從來沒有過這種經驗…

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◆ From: 220.137.91.49
推 cleanbottle:不需要vortex吧...我曾因為用vortex而膠不凝
→ cleanbottle:改用倒轉tube來mix就沒在發生過膠不凝的狀況
→ cleanbottle:不過你說tube裡剩下的都有凝.那可能又跟我的情況不同
推 cleanbottle:我是vortex mix後,連tube裡的都不凝
推 vixen:接觸空氣會比較慢凝
推 wensing:抽真空！試試看！