[求救] run SDS-PAGE速度太慢

[hird (無底洞)]

請教板上各位高手 我最近在跑SDS-PAGE時發現我的電泳速度太慢

我們家是跑大片膠(13*15) 10%的gel大約跑56V 16hr可transfer

我之前跑都很ok 最近不曉得到底哪裡有問題 跑O/N之後早上來收還剩一大段

衝100V還是要跑個兩三個鐘頭才有辦法transfer 換過running buffer還是一樣

可是acrylamide是新配的而且有借人跑過OK APS也是用之前就配好分裝冰-20的

10%SDS也是之前用過OK的 膠體凝固的速度也正常 看起來也OK

WB出來的DATA看起來也是一切正常 markerOK protein看起來也不壞

就是除了跑電泳的速度變很慢之外似乎都沒什麼差異

我唯一想得到的是我的1.5M Tris pH8.8 可能pH值有變 可是重新測過 pH=8.80

也重新過濾 問題還是沒有解決

我在想Tris buffer在調pH值要注意室溫 我們家最近冷氣開很強 室溫都在20度以下

我的Tris buffer是差不多在17度的時候測到pH=8.80 這樣會有差別嗎??????

或者我還有哪裡沒有注意到的 能否麻煩各位高手指點一下 感激不盡

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都跑那麼久了還剩那一大段 那我整天就顧那個PAGE就好了不就什麼事情都不用做

再算個transfer跟做WB的時間 一天根本做不完 生DATA的速度變慢 我皮繃很緊阿><

嗚~~~到底發生什麼事了阿.....orz


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曾經發生過的事情 不會忘記

          祇是想不起來而已.........

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 218.161.100.164
推 CCM:看看電路接頭有沒有問題...?
推 hird:應該OK 因為大家都用同樣的系統只有我的會這樣
推 alaric:好像跟我的, 最近也是如此. 我是定電流的, 就加大電流.
→ alaric:明天跑完, 再告訴你, 變成如何.
推 lolity:檢查一下gel的兩側是否跟spacer密合，有縫隙的畫會造成
→ lolity:電壓/電流不從gel通過，於是完全跑不動。
推 brt:定電壓的話  應該會觀察到電流值突然變小.
推 pacity:我有遇過power supply不夠力的狀況 若有其他台可以換換看.
推 alaric:不是室溫,也不是buffer的問題,比較像是power supply不夠力.