[問題] 螢光強度怎麼定量

[stellaluna (蒼茫宿玥)]

請教各位版上的大大
我最近打算開始做螢光染色  請問螢光的強度一般都是怎樣定量的呢
謝謝

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當你真心想做某件事情時，整個宇宙都會聯合起來幫你完成

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 作者  keku (花前醉臥流蘇帶)                                看板  Biotech     
 標題  Re: [問題] 螢光強度怎麼定量                                            
 時間  Wed Dec 15 15:26:15 2004                                               
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※ 引述《stellaluna (蒼茫宿玥)》之銘言：
: 請教各位版上的大大
: 我最近打算開始做螢光染色  請問螢光的強度一般都是怎樣定量的呢

   以auto-gain模式(通常是預設)拍下來照片或binary file中

   (target的亮度 - 背景亮度)     就是同一組set裡的絕對螢光強度

   不同濃度也是可以用這方法來比較     千萬不要用除的喔

   作圖的單位就寫arbitrary unit     
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 作者  DreamShop (夢想專賣店店長)                           看板  Biotech     
 標題  Re: [問題] 螢光強度怎麼定量                                            
 時間  Thu Dec 16 03:52:40 2004                                               
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confocal不知道可不可以
一般confocal似乎都是用光電倍增管PMT來偵測螢光
PMT似乎有photon count的功能
再搭配一下擷取軟體應該是可以計算ration吧
不過這應該算是相對的定量就是了

要不然好像還有照度分析的儀器
不過照度強弱會隨著距離而變化
而且不適合用在螢光染色
  
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 作者  keku (花前醉臥流蘇帶)                                看板  Biotech     
 標題  Re: [問題] 螢光強度怎麼定量                                            
 時間  Thu Dec 16 04:54:24 2004                                               
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※ 引述《DreamShop (夢想專賣店店長)》之銘言：
: confocal不知道可不可以
: 一般confocal似乎都是用光電倍增管PMT來偵測螢光
: PMT似乎有photon count的功能

   若要count  更應盡量避免使用到PMT    PMT傳送的是電流訊號

   十分容易在傳輸過程中lose訊號及引進雜訊  降低S/N level

   因為線路的損耗功率是I^2*R  這是為何台電都要用高壓電、低電流傳輸電力的原因

   最好用amplifier-based的photodiode或在detector外另接current amplifier

   將電流訊號瞬間轉換成電壓訊號  再傳入A/D converter或fram grabber


   By the way     Confocal的特色跟螢光定量沒什麼關係就是了 ^^      
: 再搭配一下擷取軟體應該是可以計算ration吧

   以我用過的軟體  最推薦「MetaMorph」  介面容易上手

   有很多好用的功能(ex.自動定位、自動換算歸零背景值..etc.)

   現在自己是用「Transform」   直接將影像轉成二位元碼來計算

   在做圖上會精確許多  比較放心放進paper裡

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推 fjubiology:Metamorph真是太好用啦！