[求救] 去除SDS方法

[xenosaga1026 (sam)]

目前實驗設計是要用IP的方式將目標protein抓下來

跑SDS-PAGE後挖點

再用Mass的方式來看interaction protein

因為使用的是culture cell (293T)

怕IP下來的protein量太少Mass會打不到

所以目前打算將protein從protein A/G agarose上

用 1% SDS elute下來

再將4個sample(10cm dish)一起通microcon來濃縮

但問題是我怕濃縮後鹽類濃度及SDS濃度會過高

不知道microcon能不能去除SDS

亦或是有其他方法可以去除SDS呢?

目前實驗面臨最大難題就是protein量不夠

Mass打出來的結果都在不可信區間(用Mastco搜尋 band都在綠色區間)

雖然score都有25以上 不知道這些到底能不能用

謝謝

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◆ From: 140.109.64.74
推 hangzer:Dialysis?
推 Rarelay:為什麼不用 pH 2.0 glycine buffer elute?
→ xenosaga1026:glycine elution的效果好像沒有SDS好
→ trumpet:2樓的重點是pH2.0，不是glycine，Protein A/G用pH2.0就OK
推 Rarelay:mass分數低不是蛋白量不夠，是挖膠後純化過程有汙染吧。
→ skylawer:請問上MS前到底是 in gel or in solution digestion?
推 chosenone:microcon是用分子量大小去篩 大部分的鹽和SDS都會流過去
→ chosenone:不過要注意你要看的蛋白分子量大小 不要選到太大的 不然
→ chosenone:你要看的蛋白也流過去了...
→ xenosaga1026:謝謝大家的寶貴意見~上mass是in gel
→ wh0612:可以用Z-tip desalt?