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小弟目前是用中研院RNAi core的質體, 並依照中研院網站給的protocol下去試。 唯一跟protocol不一樣的是, 我是用lipofectamine 2000來做293T的transfection, 並非使用建議的TransIT-LT1。 transfection的方法如下: 將細胞養在6cm dish,前一天seeding,隔天細胞約五分滿,做transfection DNA total 5ug, lipofectamine 10ul,使用OPTI-MEM,約6小時後換medium 做完隔天看細胞都還平安無事 到第三天準備收virus時發現細胞已經死了好多... 請問這是正常的嗎?還是因為liposome加了太多才死掉的? 不知道板上各位先進是否有人做過這方面的技術,是否有什麼該注意的地方 雖然protocol已經寫得蠻詳盡的 但畢竟沒人可以指教做起來怕怕的>"< 先感謝各位囉! -- A: Are you kidding? B: No, I am serious. --------------------- A: 你是凱蒂嗎? B: 不,我是喜瑞兒。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.121.97
driws:我們之前DNA跟lipofetamine 2000是1:1 細胞ok 09/02 12:17
slowmove:本人試過一陣子,用他們建議的LT1的確會活的較健康. 09/02 14:34