推 HIbaby:最近很流行問問題的方式說 @_@ 219.1.156.27 02/16
推 Bioexplorer:深有同感 @_@!! 61.217.146.26 02/17
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作者: vadac (一堆問號???) 看板: Biotech
標題: Re: [無奈女孩跪問]about HRP-ABTS做ELISA的呈色反應
時間: Thu Feb 17 22:12:01 2005
我之前做過的ABTS呈色,是用自己配置的方式
ABTS的確需要完全溶解才行喔
我想您可以試試看
利用trouble shooting的方式檢視每個實驗過程
例如自行配置適當濃度的H2O2+citrate buffer(通常kit說明書中即會註明使用濃度)
再與kit的ABTS混勻,嘗試看看是不是kit中試劑是不是有問題?
另外,也有可能是您ELISA的HRP濃度不足所造成的(例如您未混勻detection Ab-HRP
即取出稀釋等可能原因)
還有就是,根據我的經驗,ABTS是比較不靈敏的呈色劑,如果您的ELISA可用其他呈色劑取代
可以嘗試看看TMB(只是價格較高),但靈敏度較佳且呈色時間可縮短許多!
請您參考看看!
祝實驗順利^^
※ 引述《candida (無)》之銘言：
: 無奈女孩有個問題想問大家
: 就是我做ELISA的二級抗體是經過HRP lable的,所以要用ABTS作為受質呈色.
: 我做的結果,往往不是全部呈現綠色,就是完全無色,所以我知道有地方出錯了
: 我使用的ABTS solution是Zymed的KIT, 100X ABTS solution與10X buffer(含H2O2與
: Citrate buffer),但總出現一個問題,就是ABTS solution總是有沉澱,必須要置於37度C
: 後才能夠使之完全溶解,可是這往往造成我最終的結果完全都無色,不知道是否有人使用
: 過ABTS-HRP做呈色?拜託給小妹一些指教或經驗分享....謝謝喲! Orz
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 218.168.46.96
→ vadac:忘了註明test時記得加入序列稀釋的HRP 才會呈色哪! 218.168.46.96 02/17
→ vadac:還有您整盤一樣顏色應為呈色不良且時間過久所導致 218.168.46.96 02/17
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作者: candida (無) 看板: Biotech
標題: Re: [無奈女孩跪問]about HRP-ABTS做ELISA的呈色反應
時間: Fri Feb 18 01:16:52 2005
請問您用的也是Zymed的ABTS嗎?是使用它們的soltion與Buffer還是只有solution而已?
我記得是citrate 加0.03% H2O2,可是不太會配,所以後來才買KIT的....不知道您是否有
配過??我有想過要用其它的substrate 呈色,謝謝您告訴我TMB是個不錯的選擇^.^
HRP我有用0.05% Tween稀釋20000倍,不過就是不知道問題出在哪,導致不是全綠就是全部
無色!! 謝謝您的建議喲!!真的.....
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◆ From: 134.208.33.153
→ candida:請問序列稀釋才能呈色的目的在哪裡呀?不懂.... 134.208.33.153 02/18
推 vadac:我是用自行配置的方式 218.168.46.96 02/19
→ vadac:序列稀釋必須包括blank,這樣才能判斷呈色是否正常뀠 218.168.46.96 02/19
推 candida:您的意思是指HRP經過序列稀釋後,再加入standard 134.208.33.153 02/20
→ candida:與blank中,最後再以等量的呈色劑呈色嗎? 134.208.33.153 02/20
→ candida:您有配製的protocol供我參考嗎?謝謝您喲! 134.208.33.153 02/20
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作者: citrinin (anticitrinin) 看板: Biotech
標題: Re: [無奈女孩跪問]about HRP-ABTS做ELISA的呈色反應
時間: Sat Feb 19 10:46:53 2005
※ 引述《candida (無)》之銘言：
: 請問您用的也是Zymed的ABTS嗎?是使用它們的soltion與Buffer還是只有solution而已?
: 我記得是citrate 加0.03% H2O2,可是不太會配,所以後來才買KIT的....不知道您是否有
: 配過??我有想過要用其它的substrate 呈色,謝謝您告訴我TMB是個不錯的選擇^.^
: HRP我有用0.05% Tween稀釋20000倍,不過就是不知道問題出在哪,導致不是全綠就是全部
: 無色!! 謝謝您的建議喲!!真的.....
不知道你有沒有注意到
block 的液面高度一定要夠
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◆ From: 219.81.160.132
推 candida:不是很了解您的意思耶?? 134.208.33.153 02/20
→ Nikio:well的周邊也會吸附東西阿 140.109.32.8 02/21
推 citrinin:若 block 200 則其他最好都別超過 180 61.31.161.33 02/21
→ citrinin:其他指的是一壯雂G抗和呈色劑 61.31.161.33 02/21
推 candida:我沒注意過耶!謝謝你的提醒喲,我試試看.... 134.208.33.153 02/21