推 abc0:SDS不可超過0.1% 143.48.8.154 06/23
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作者: key () 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 有關protein濃度的測量
時間: Sun May 29 11:22:11 2005
※ 引述《ghjkl (想去加勒比海釣魚)》之銘言：
: 在我家的實驗室中
: cell lysate中蛋白質濃度的測量是利用Bio-Rad出的protein assay來完成的
: 但是我發現這各reagent對於RIPA lysis buffer會有呈色反應
: 且反應強度我認為已經有可能影響到我實驗準確度的程度了
: 因此不知道各家對於蛋白質濃度的測量是否有其訣竅或方法
: 可以避免RIPA lysis buffer的影響
: 以下是我測量蛋白質濃度的步驟
: 將reagent利用2次水稀釋成1倍後
我覺得稀釋lysate可能比較好
: 每1ml的1倍reagent加入5ul的cell lysate
: blank則是1ml的reagent加入5ul的RIPA buffer
: 然後測595nm的吸光值
: 理論上這樣可以把RIPA所造成的影響去除
: 但是問題在於收cell lysate的時候
: 我加入100ul的RIPA收回來的cell lysate肯定超過100
: 因此Blank往往太強造成如果有些蛋白質濃度比較少的sample
不過protein少 又不能dilute lysate......
: 濃度測出來極有可能是負的對我的實驗影響頗大
翻一下BIO-RAD protein assay的說明說 查一下buffer裡是有哪些不適合的成分
看看濃度是否已經超過容許範圍
RIPA lysis buffer裡面應該有detergent吧??
如果是的話
可以去買 Dc protein assay, BIO-RAD 也很好用
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◆ From: 219.84.20.245
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作者: citrinin (anticitrinin) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 有關protein濃度的測量
時間: Mon May 30 07:38:08 2005
※ 引述《ghjkl (想去加勒比海釣魚)》之銘言：
: 在我家的實驗室中
: cell lysate中蛋白質濃度的測量是利用Bio-Rad出的protein assay來完成的
: 但是我發現這各reagent對於RIPA lysis buffer會有呈色反應
: 且反應強度我認為已經有可能影響到我實驗準確度的程度了
: 因此不知道各家對於蛋白質濃度的測量是否有其訣竅或方法
: 可以避免RIPA lysis buffer的影響
: 以下是我測量蛋白質濃度的步驟
: 將reagent利用2次水稀釋成1倍後
: 每1ml的1倍reagent加入5ul的cell lysate
: blank則是1ml的reagent加入5ul的RIPA buffer
: 然後測595nm的吸光值
: 理論上這樣可以把RIPA所造成的影響去除
: 但是問題在於收cell lysate的時候
: 我加入100ul的RIPA收回來的cell lysate肯定超過100
: 因此Blank往往太強造成如果有些蛋白質濃度比較少的sample
: 濃度測出來極有可能是負的對我的實驗影響頗大
用他們出的另一款
RC DC Protein assay
是先將 protein 沉澱, 再回溶, 再呈色的方法
比較麻煩, 但超準
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◆ From: 219.81.164.19
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作者: littlevi (好想打網球啊) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 有關protein濃度的測量
時間: Wed Jun 15 00:18:55 2005
※ 引述《ghjkl (想去加勒比海釣魚)》之銘言：
: 在我家的實驗室中
: cell lysate中蛋白質濃度的測量是利用Bio-Rad出的protein assay來完成的
: 但是我發現這各reagent對於RIPA lysis buffer會有呈色反應
這個可以看妳的RIPA buffer裡面含有的藥品是否會超過
Bio-Rad protein assay所能忍受的濃度，在catalog上有寫
某樣東西超過了，測出來就會可能出現你這種現象，或者其他問題。
: 且反應強度我認為已經有可能影響到我實驗準確度的程度了
: 因此不知道各家對於蛋白質濃度的測量是否有其訣竅或方法
: 可以避免RIPA lysis buffer的影響
: 以下是我測量蛋白質濃度的步驟
: 將reagent利用2次水稀釋成1倍後
還有這個protein assay的稀釋倍數是 1ml reagent + 4ml ddH2O
or 40ul reagent + 160 ul reagent，這樣測出來比較沒問題。
: 每1ml的1倍reagent加入5ul的cell lysate
: blank則是1ml的reagent加入5ul的RIPA buffer
: 然後測595nm的吸光值
: 理論上這樣可以把RIPA所造成的影響去除
: 但是問題在於收cell lysate的時候
: 我加入100ul的RIPA收回來的cell lysate肯定超過100
: 因此Blank往往太強造成如果有些蛋白質濃度比較少的sample
: 濃度測出來極有可能是負的對我的實驗影響頗大
因為稀釋不夠的話，測出來顏色都是一樣的而且是不太會變色，怪怪的值就開始出現。
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◆ From: 220.135.148.218
在我家的實驗室中
cell lysate中蛋白質濃度的測量是利用Bio-Rad出的protein assay來完成的
但是我發現這各reagent對於RIPA lysis buffer會有呈色反應
且反應強度我認為已經有可能影響到我實驗準確度的程度了
因此不知道各家對於蛋白質濃度的測量是否有其訣竅或方法
可以避免RIPA lysis buffer的影響
以下是我測量蛋白質濃度的步驟
將reagent利用2次水稀釋成1倍後
每1ml的1倍reagent加入5ul的cell lysate
blank則是1ml的reagent加入5ul的RIPA buffer
然後測595nm的吸光值
理論上這樣可以把RIPA所造成的影響去除
但是問題在於收cell lysate的時候
我加入100ul的RIPA收回來的cell lysate肯定超過100
因此Blank往往太強造成如果有些蛋白質濃度比較少的sample
濃度測出來極有可能是負的對我的實驗影響頗大
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曾經有人問我說:
如果你的女朋友被第三者搶走了你會怎麼辦?
我回答說:
那我就變成第四者把她搶回來
BY ghjkl
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