推 Mouton:沒有寫一下實驗室八卦?XD(誤) 08/28 00:35
→ Ariska:助理有說教官八卦不要隨便亂講出去...畢竟這是他私人事情 08/28 06:29
推 Mouton:我只是想說助理老公很可愛 :P 08/28 19:48
→ Qmorejay:我還以為是樓上兩位的八卦:p 08/28 21:12
Day3 0827
今天先看了昨天MRSA的測定結果，訝異的發現有兩株細菌室給的報告是MRSA的，
抑制圈都已經大於13mm了(MRSA的抑制圈理論上應該是小於10mm)
(MSSA的理論上則是大於13mm，助理說中間的模糊地帶可能就要重做或是用其他方法)
有一株抑制圈還大到15mm，很明顯是MSSA，助理中午也有打給醫師講這件事情。
(我的臨床385是最明顯的MRSA......抑制圈一整個小)
接下來做的就是今天的重頭戲--DNA的萃取。(阿哈哈有把步驟照下來喔)
第一步就是把一個loop(今天助理取的時候是平的，菌量似乎偏少@@)加到Q水裡，
然後vortex把細菌打散，這時候就去一邊找下一步要的lysozyme和lysostaphin，
lysozyme是助理現場配製的，濃度好像是0.25g/1ml的樣子(有點忘了)，
然後是用一種很特別還有齒輪的刮勺(助理說如果是取少量的話就用那種)，
上面的齒輪轉一轉會讓上面的粉末彈一點點下來，就不會出現"啊~手滑~"的狀況了。
然後在隔壁的實驗室借到了小小瓶、放在冰箱的lysostaphin，那種enzyme都很貴@@
在兩樣都加完之後就搖一搖，放到37度的恆溫箱(其實我一直不知道名稱)裡一小時，
半小時到要再拿出來一次搖一搖再放回去，等待的時候就是歡樂念paper時間了。
拿出來之後加cell lysis solution，vortex後加防爆蓋放在80度的乾浴槽裡15min
(乾浴槽也是到隔壁去用的，他們正好有再做另一種DNA萃取實驗是加熱到100度以上的)
拿回來冷卻後加入RNase(也是隔壁的，他們正好有就不用重配了)之後就先休息去吃飯。
[照步驟看的話加入RNase應該是15~30min就可以了，不過因為休息的關係我們放了2hr]
回來的時候就加了protein solution，然後迅速的去vortex(持續20秒)，
這時候會發現整個管子會從澄清變成稍微濁濁的，再拿去用13000rpm離心3min，
離完之後慢慢的取上清液出來(底部沉澱的應該是protein)加到新的eppondrof裡搖一搖，
(新的eppondrof裡面已經有加異丙醇了)就可以發現裡面有一絲一絲的DNA出現，
不過我們非常難過的發現我們三個的搖完之後都沒有一絲絲的出現就是，
之後再拿去離心(這時候助理就一邊安慰我們"說不定離完就會出來了!")，
助理的那三管在離完心之後很明顯的看到一球白白的沉在底下，而我們的還是沒有。
離完後把上清液倒出來，再加入70%酒精，上下翻個十次之後再拿去離心一分鐘，
再把上清液倒出來，然後風乾(其實加酒精的這個步驟只是要讓他去除水分)。
風乾之後加入DNA hydration solution把底下留著的那一小球DNA衝起來
(這時候可以用手指彈一彈讓她比較容易起來)
這一步就是今天的結尾步驟了，因為要室溫overnight。
超充實的一天，步驟雖然繁瑣不過自己動手做和看真的很有趣。
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