1.簡介:分離不同層級蛋白質
分離技術是靠蛋白質不同溶解度 大小 電荷量 吸附性質 親附性(affinity)
2.蛋白質分離方法
(1)要先知道一些蛋白質性質:MW pI 溶解性 變性溫度
(2)第一不分離希望能應用在大量, 所以用溶解性差異來分
蛋白質是一poly-electrolytes 所以其溶解性受到AA種類和電荷影響
沉降法會是第一用的分離步驟
蛋白質可以被選擇性池電透過改變其緩衝溶液pH ,離子強度,dielectric constant
temperature
鹽析:中性鹽類水溶液中, 低濃度會增加蛋白質溶解程度
增加離子強度, 會造成沉澱
常用硫酸銨, 因為它很容易溶於水, 使用時分兩部
一開始先加到還沒把要的蛋白質沉降出來, 其他不易溶的蛋白質先過濾
在加稍過量, 讓要的蛋白質析出, 但其他不要得依然留在水中
缺點:硫酸銨可能會汙染sample
等電點分離(pI)