Part II Measurement of Viral Infectivity
(1)Dilution Endpoint
一.目的
已實驗了解TCID 的測定方法和計算,及計算病毒力價.
二.原理
TCID為"Tissue Culture Infective Dose,而TCID 指所種的病毒能夠造成50%培養細胞病變
的濃度,就某些方面來說類似LD 的意義.將病毒液連續10倍稀釋10次後,種入已含
細胞的96 well plate中,藉由觀察CPE便
可知道其TCID .而再將TCID 取倒數即得到病毒力價(Virus titer),可作為病毒感染力的
指標.
三.材料:
EO cell in 96 wells
IPNV
L-15 medium+2%fbs
PBS buffer
Laminer flow
Pipets 1ml,5ml
Pipet-add
四.方法:
I.連續稀釋
(a) 取十管小離心管,各加入0.9ml的L-15-2 medium.
(b) 取0.1ml IPNV suspension 加入第一管離心管中.
(c) 換pipet,於第一管中抽吸混合後吸取0.1ml加入第二管中.
(d) 以下同上步驟,加到第十管離心管,即得到濃渡各差十倍的病毒液.
II.種入病毒
(a) 將已有EO cell之96 well plate中mediun迅速甩掉.
(b) 於第11,12排加入L-15-2 medium做為對照組.
(c) 從第十管小離心管中吸取病毒液,於第10排中之八孔內各加0.1ml.
(d) 可不換pipet,從第九管離心管吸取病毒液,於第9排之八孔內各加0.1ml.
(e) 同上操作,由於病毒液是由稀到濃且各差十倍,故過程中可不換pipet.
III.觀察計算
將種好的96 well plate以膠布封口後,置於18 c培養,四五天後再置於倒立顯
微鏡下觀察其CPE,並作記號.求得TCID 後計算病毒力價.
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