六.討論:
1.關於TCID ,它是一種類似半致死劑量(LD )的指標,能夠大概地指出一病
毒懸浮液(濃度不一定)感染力的多少.要注意的是這樣的指標使用上有
限制,例如它使用的宿主細胞(例如EO和TO cell)及單位(1ml,0.5ml...)
要相同,比較才有意義.另外,感染力和病毒顆粒數,致病力並沒有直接的關
聯,測TCID 並不能知道病毒顆粒數或它的致病力強弱.一般而言實驗室培養
的病毒其致病力都大降,必需種回其正常宿主在分離出,如此重複四五次才
可回復其致病力.
2.進行連續稀釋時,由於是由高濃度到低濃度,因此為了防止稀濃度病毒懸
浮液受影響,每次都要換pipet.而在進行接種時因為是由低濃到高濃,影
響較小,故並不每格換pipet.
3.這次使用的medium為L-15-2的原因是,我們的目的在於讓病毒感染細胞而
非讓細胞快速生長,因此只要能讓細胞維持基本的生存就行了,不用添加太
多的FBS.
4.在操作的過程中可能影響到此實驗的因素有:一,原96 well plate孔中的
medium在種病毒前並沒有全部甩乾,則殘留的過多且不均的medium將會稀
釋加入的病毒懸浮液,而使每格濃度不一,出現誤差.二,在使用pipet,pipet
add時,戳到細胞層或將液體直接噴向細胞層而將之沖落.三,封口的膠布在
邊緣處容易脫落,如本組的膠布於右下角處即一直脫落,右下處疑似受到污染
(有奇怪的異物存在,長線狀似毛髮).
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