Part II Measurement of Viral Infectivity
(2)Plaque Assay
一,目的:
練習病毒定量的方法.
二,原理:
病毒並沒有運動能力,只能隨所處的介質而移動.本實驗使用固體培養基以及固定
的細胞,因此可將病毒視為無移動能力,只能由最初感染的那個細胞慢慢感染周邊
相鄰的細胞,最後成為一個以最早被感染的細胞為圓心的圓,在此緣之內的細胞均
因被病毒感染而溶解掉.因此我們只要計算被溶出的細胞層的洞數,便可知原病毒
液中的有效感染顆粒數,達到定量的目的.
三,材料:
L-15 medium+2%fcs+0.6%low melting point agarose
EO cell in 6 wells plates
1.5ml eppendorf
IPNV suspension
1000 l,100 l pipetman
四,步驟:
(1) 以連續稀釋方式製備10 ,10 ,10 IPNV suspension 各1ml.
(2) 吸掉6 well plate中的medium後,以PBS洗兩次.
(3) 分別將10 ,10 ,10 IPNV suspension加入上下兩孔中,於室溫靜
置30min使病毒感染細胞.
(4) 吸去病毒液,再以PBS清洗兩次.
(5) 在每格中加入1.5ml之0.6% low melting point agarous culture medium,加蓋
後放入18 c培養.
(6) 五天後以固定液(Carnoy's fixative fluid)固定十分鐘後,以自來水沖洗之,
以沖掉agarous,固定液,並水化細胞層.
(7) 以10% Giemsa'sstain染色10～20min.
(8) 計算plague.
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