五,結果:
1.由於細胞層受損面積過大,無法取得有效的數據.在仍有細胞層的範圍內
plaque數如下:
10 上12下10
10 上17下 8
10 上20下 7
但因各格內細包損失的面積均大於一半且差異很大,因此所得數據並沒有
討論的意義.
六,討論:
1.本實驗使用low melting point agarous之意義在於:一,將整個環境固定住,
讓病毒不會隨介質而移動.二,一般agar的凝固點約五六十度,在此溫度下加
入則會使EO cell死亡.因此使用agar的萃取物(凝固點約18 c)來製成固體的
培養基.但為了防止其凝固,使用前是擺在恆溫水浴中,故要先回溫才可加入
已有EO cell的格中,以免傷害細胞.
2.在操作過程中有很多機會會損傷細胞層,除了常發生的吸量管戳到或衝擊造
成細胞層損傷外,加入agarous的溫度太高或速度太快也都會破壞細胞層.本組損
傷發生的原因是Laminar flow的風.在第二次以PBS清洗時,加入的PBS量較少(大
約只有1ml/格),加入後並未加蓋便開始整理檯面並等agarous回溫.大約擱
置一分鐘後,每格中央一圈圓形區域皆已乾掉,細胞亦死亡.而在沖去agarous時
,亦因水流太強而將其中三格的下半圈細胞沖去,結果便造成細胞層面積過小而
無法討論的狀況.
3.計算plaque時,要取彼此大小都差不多的來計算.大小與周遭較不一的可能
是被pipet戳到的洞或後來才被未附著病毒顆粒感染(通常較小),甚至是過
了太久以至於有二到三個plaque彼此重疊(會較大而不規則)的情況.
4.理論上,所得的結果會是彼此成比例關係.若10 得到10個plaque,則0.5*10 的
會是50個,而10 的則是100個.但這要在稀釋很精確而混合很均勻,操作過程
完美的狀況下較有可能發生.
5.染色後所關察到的plaque為細胞被病毒感染死亡後溶解掉的區域,由於已無細胞存
在故無法染色,形成空動的無色區域.
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