推 s8ui:大推~~ 想請問 任何的大戟都可以這樣繁殖嗎？ 09/08 15:16
→ gpoidg:發文選項請改用[心得]喔！ 09/08 21:25
→ ilikedrums:原來算心得啊，謝謝告知@@" 09/08 21:26
→ ilikedrums:1F，其他大戟沒試過，不同種配方應該還是會不同唷！ 09/08 21:27
推 lock79729:厲害厲害!!! 推推推!! 09/08 22:32
各位花友大家好，這是一篇介紹麒麟花花芽組織培養的文章，請多指教^^
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網誌全文：http://saahort.pixnet.net/blog/post/44016158
麒麟花花芽組織培養
基本介紹：
麒麟花，大戟科大戟屬，學名Euphorbia milli（小花品系），
英文名Crown of Thorns，是個花很可愛全身有刺的植物，不過現在也陸續育出
無刺品種了。可採用扦插、嫁接、種子以及這邊要介紹的組織培養等方法繁殖。
麒麟花的花為花序，外觀看起來像花的部分其實是苞葉，真正的花是中間那一坨。
苞葉基部有芽點，第一層花開後，花芽逐漸從苞葉與花的交界中伸出，長成第二層，第
二層以此類推長出第三層，看起來就是一層疊一層的花了！根據文獻的定義，
第一層花未開時為immature stage（未成熟階段）、第一層花開時稱為1st
stage（第一階段）、第二層花開就稱為2nd stage（第二階段），以此類推。
組培時不同階段的花芽效果有差，一般建議取immature~1st stage的花作材料。
http://pic.pimg.tw/saahort/1347026577-1006158699.jpg
方法：
麒麟花組織培養可透過癒傷組織誘導（取子房或花梗），其變異率較高，
適合用於育種；或誘導芽體萌發（取莖頂或花序），優點是穩定性較高，
可以生產均一的種苗，此處介紹的是利用花芽誘導為葉芽的方法進行組織培養。
取用花芽的目的為消毒容易，而且一棵麒麟花可開出許多花序，比起取莖頂來說，
摘除花序對於母體的傷害較小，又可持續摘花。根據卜莎蒂2008年的文獻指出，
以花序組培大量繁殖之麒麟花單株成本為1.4~1.5元，可見以組織培養大量繁殖麒麟花具
有極佳的商業潛力。
原理：
利用激素使原本欲進行生殖生長的花芽逆分化為營養生長的葉芽，
讓葉芽長出新植株。在組織培養的處理中，經常使用生長素（Auxin）及
細胞分裂素（Cytokinin），前者可誘導不定根，後者誘導不定芽，
因此麒麟花組培時先使用細胞分裂素來誘導葉芽，激素的其他功能此處不多加贅述。
材料：
小花麒麟花，白花及紅花品種，詳細栽培種名稱不明，取immature與stage 1st花序。
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過程說明：
1.2010.09.29 初代培養
目的：誘到花芽逆分化形成葉芽，進而長出shoot。
方法：取下花朵，以1%次氯酸鈉消毒5~10分鐘後，無菌水清洗三次，種於試管中。
配方：½ MS + 5 ppm BA, 3% sucrose, 1% agar, pH 5.7
↓將花苞基部插入培養基即可
http://pic.pimg.tw/saahort/1347026581-3542889990.jpg
↓過幾天會看到花開了，也有些被汙染（右圖）。
http://pic.pimg.tw/saahort/1347026582-3492967542.jpg
↓2010.11.04 一個多月後可觀察到新芽抽出，也有些褐化死亡（右下圖箭頭處）。
http://pic.pimg.tw/saahort/1347026583-247962184.jpg
2.2010.11.08第一次繼代
目的：增殖。
方法：以解剖刀切下芽體，種入含繼代培養基之試管中。
配方：½ MS + 2 ppm BA, 3% sucrose, 1% agar, pH 5.7
↓2010.11.08剛切下
http://pic.pimg.tw/saahort/1347026584-2069047565.jpg
↓約2~3週後每個培殖體可產生3~5個芽不等。
但培殖體與培養基交界面產生大量callus（右上圖箭頭處），
老師表示：「切的技術不好」
http://pic.pimg.tw/saahort/1347026585-3623950001.jpg
3.2010.11.25第二次繼代
目的：繼續增殖。
方法：以解剖刀切下芽體，種入含繼代培養基之蘭花瓶中。
配方：同第一次繼代。
http://pic.pimg.tw/saahort/1347026586-635965891.jpg
4.2011.01.02出瓶
目的：出瓶馴化。
方法：取出組培苗，將糾纏在一起的苗切開，切除癒傷組織或洗淨根系，
沾發根粉插入育苗海綿，以1/2 MS養液澆灌。
↓組培苗有好有壞，左上很妥當；右上長在癒傷組織上很糟糕，
移出後要切除癒傷組織以免影響發根；左下竟然開花了；
右下包含根系，需洗去上面殘留的培養基以免發霉，但清洗時又可能傷根，
有些作法是不洗直接埋入土中，也有說法認為有些植物瓶內根系功能不健全，
乾脆直接砍掉地下部，把地上部插進土中重新發根。
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↓沾取發根粉
http://pic.pimg.tw/saahort/1347026589-3709947846.jpg
↓種入育苗海綿，放入箱中保濕（或直接放置霧床），現在想想我真是吃飽太閒，
直接種土就好種什麼海綿…
http://pic.pimg.tw/saahort/1347026590-1559377661.jpg
http://pic.pimg.tw/saahort/1347026591-1742080826.jpg
↓長大後的樣子
http://pic.pimg.tw/saahort/1347026591-3876695533.jpg
討論：
1.發霉問題：選用immature的花序汙染率較低，因為花朵還未開，
可避免空氣中的灰塵進入。另外剛開始用了過期的漂白水，導致全軍覆沒…。
2.以1%次氯酸鈉消毒5或10分鐘對於汙染率沒有明顯影響。
3.繼代過程中常可看到大量癒傷組織，跟切的技術不好也有關係，
切下芽體時傷口過多，BA在切口處累積，無法抵達芽體，
而麒麟花內生Auxin濃度高，推測為Auxin與Cytokinin拮抗之下產生癒傷組織，
進而導致切口處癒傷組織大量生長，老師建議採雙層培養，
可以改善吸收不良的問題。
4.本次組培採用0.5或5 ppm BA進行誘導，發現0.5 ppm BA即可誘導芽體分化，
初代36天後共22管長出芽體，只有一管褐化；然而採用5 ppm BA處理者，
約2周褐化率即達80%以上，且最終只有2~3管產生芽體，對照前面同學的組培資料
，同樣發現極高的褐化率，顯示高濃度BA容易造成培殖體死亡。然而前人研究皆採
高濃度處理，可能與誘導速度和季節有關，尚待進一步研究。
麒麟花花序本身即帶有生長點，誘導生長點產生芽體，相較於無生長點的
組織誘導芽體要來得簡單得多，也許根據生長季節不同，
可以在生長點萌動的時期減少BA濃度。
5.本文的拍照技術並不及格，好孩子不要學，若能利用黑絨布配合固定器（或黏土）
和燈光，可以拍出更美麗的照片。
6.一般來說，組培苗經Cytokinin誘導長芽後，還需要利用Auxin誘導發根，
然而麒麟花內生Auxin濃度相當高，不需添加額外的Auxin即可自行發根。
↓麒麟花在未添加Auxin的培養基中也可以長出許多根系。
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文末附上：麒麟花苞葉基部芽點的電子顯微鏡照片，材料為immature~1st stage.
http://pic.pimg.tw/saahort/1347026576-3881011499.jg
對麒麟花組培有興趣的話可以參考相關文獻：
1.卜莎蒂。麒麟花利用花序培殖體之微體繁殖。中興大學研究所碩士論文。2008。
（這篇內文是英文）
2. Fascella, G. and G. Zizzo. Efficient propagation technique of
Euphorbia x lomi Thai hybrids. 2009. Hortscience. 44(2): 495-498
3. Xu, B., W. Dai and W. S. Chao. An efficient method for in vitro
regeneration of leafy spurge ( Eupho rbia esula L.). 2008.
In Vitro Cell. Dev. Biol. –Plant. 44: 548-556
4. Y. H. Dewir, D. Chakrabarty, E. J. Hahn and K. Y. Paek. 2005.
Reversion of inflorescence development in Euphorbia millii and its
application to large-scale micropropagation in an air-lift bioreactor.
Journal of Horticultural Science & Biotechnology. 80(5): 581–587
謝謝收看！
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