推 sacoleeye:重點是做一次自費至少五千.... 11/27 04:33
推 cnlin6:不用5000元吧...一般件是1000元.. 11/27 14:22
RT-nPCR是Reverse transcriptase nested polymerase chain reaction 之簡稱...
是一個非常敏感且很實用的分子生物學技術.
PCR原理是先以高熱將雙股DNA變性.讓特異性的引子煉合至模板上再以聚合酵素進行延展
做出另一個互補模板...此動作反覆許多次...如此一來可以得大約n X 2的35次方以上的
模板(視PCR cycles而定.n指檢體中所含之DNA).
所以檢體之中一旦有模板存在(即可被特異性引子煉合上之DNA)..
就可以藉此進行DNA量的放大...最後進行染色.
在UV下觀察是否有預期的片段出現來判定檢體是否為陽性...
目前以RT-nPCR技術檢測貓冠狀病毒亦是如此
(因為冠狀病毒為一RNA病毒所以須先進行RT動作)...
如果檢體中所含病毒量較多則可以看到很明顯的片段...
但如果少量病毒時..可透過nested PCR技術再進行第二次放大動作...
如此一來少量的病毒可以經由二次的PCR放大而被檢測出來...
但是此技術還是有最低檢測量的限制...
所以如果PCR的"引子夠具特異性"..."操作人員技術夠純熟".
檢測出陽性結果就是陽性.陰性的話也有可能是因為病毒量太少而檢測不出來..
(但這種情況經多次採樣檢測有可能會檢測到病毒)...
另外...PCR檢測的結果只能反應出動物"當時"採樣的狀況...
(所以採集檢體的人員也是很重要的)這次檢測為陽性並不是表示下次檢測就一定會陽性..
反之這次檢測為陰性並不表示下次的檢測就一定是陰性.
在臨床上有時會見到血液檢測出貓冠狀病毒(健康貓隻喔)..
但隔一星期檢測卻變陰性
(這表示第一次檢測時剛好有病毒血症.而第二次檢測時病毒血症已消失)..
另外也常見到第一次糞便檢測陰性..一個月後檢測卻為陽性...
這有可能是因為第一次檢測時病毒量不夠多..
也有可能是在這一個月中貓感染了貓冠狀病毒..
另外也有可能是貓隻早就感染了只是第一次採樣時並沒有在排毒..所以是陰性...
以上這些都是臨床上常出現的可能性...等等......
最後...PCR技術雖然敏感且實用...
但重點還是要有夠具特異性的引子及技術夠純熟的操作人員...
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