作者pent (愛、失敗、死亡)
看板Biotech
標題[求救]cell cytosol & membrane fraction
時間Thu Mar 27 13:33:28 2014
找到一個paper上寫
"Frozen tissues were powdered at liquid nitrogen temperature and homogenized
in buffer A (5 mM TRIS, 4 mM EGTA, 2 mM EDTA, 5 mM dithothreitol, 1 mM
phenylmethyl sulfonylfluoride and EDTA-free protease inhibitor [1 tablet/10
ml]). The homogenate was centrifuged at
100,000 X g for 30 minutes ..
...
後來跟實驗有做過得討論,有做過mitochondria fraction的
覺的說用16000xg, 轉1-2hr也可以, 但是量會比較少
因為超高速離心管要把體積補倒滿,約12mL,
這樣一下我怕濃度會太稀
請問如果改16000xg 轉1-2hr 真的可行嘛?
謝謝
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推 asada1l:做過4小時也離不出個東西 03/27 16:30
→ Invec:16000g 能把membrane離下來嗎? 很懷疑 03/27 18:10
推 ad1980:我做過 membrane 的,是用 floatation, sucrose gradient 04/07 15:21
→ ad1980:基本上 membrane 會浮在兩曾之間 04/07 15:22
→ ad1980:But I used cultured cells 04/07 15:23