[求救] PCR primer帶有GGC重覆的序列

[MDCCLXXVI (1776)]

最近要在一段蛋白質前面加上GGGGS四重覆的linker

所以5' primer帶有下面的序列:
ggcggcggcggcagcggcggcggcggcagcggcggcggcggcagc

但將PCR(用phusion polymerase,band很乾淨)產物clone定序後，

發現在linker中的序列有deletion(少10幾個mer)

因為不同clone的deletion都不一樣，所以應該不是primer合錯了

想過是不是GC-rich造成的二級結構所影響

所以打算用下面的方式試試看

1. 用phusion polymerase GC buffer for GC-rich template

或

2. 加DMSO

請問有人有類似的經驗嗎?

thx~

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※ 編輯: MDCCLXXVI (203.64.48.9), 04/17/2014 19:03:08
推 bluesnow1122:你可以兩個同時做,不同濃度DMSO也可以試試3% or 5%
→ blence:如果是在primer上面，為什麼會是PCR或polymerase的問題？
→ blence:或應該說,一般是template的GC-rich太多才用上述,而非primer
※ 編輯: MDCCLXXVI (203.64.48.9), 04/18/2014 10:09:11
→ satasumi: DMSO或許可以有幫助,但有試過把重覆樣品再定序一次嗎?