→ snow200272:FA也要warm!!! or try methanol fix 04/26 00:40
推 tchan:triton X-100 只要0.1%就夠了 & DAPI看起來如何？有可能不是 04/26 11:14
→ tchan:染色過程出問題，而是細胞本身狀態就不好 04/26 11:14
→ gugu283:DAPI染起來OK, 我會試試看warm FA, 但是methanol似乎會破 04/26 13:11
→ gugu283:壞actin?那我triton 也改成0.1%試試看；細胞本身是還好雖 04/26 13:13
→ gugu283:然沒有很漂亮 但我固定完跟triton處理完在顯微鏡看 都沒有 04/26 13:14
→ gugu283:像染完以後萎縮得那麼厲害 毛邊也沒有那麼多@@ 04/26 13:15
→ gugu283:我用90%甘油封片會有影響嗎? 04/26 15:15
→ snow200272:如果DAPI沒問題~應該就是DAPI以前步驟的關係 04/27 20:59
推 oplz:不要亂教.. phalloidin 不會認 methanol fixed actin fiber 04/28 06:59
→ oplz:PFA or FA 溫的冷的都沒差 04/28 07:00
→ captdavince:請問有人有經驗應該cold去固定還是warm固定比較好呢? 04/28 19:22
→ gugu283:請問有人用過這隻phalloidin嗎?不知道有沒有人試過濃度? 04/30 11:34
→ gugu283:我有試過更高濃度但還是整顆細胞都綠色，看不太到fiber 04/30 11:36
→ gugu283:我也試過染時放37度C 但還是整棵綠 小妹都要崩潰了T^T 04/30 11:38
推 tchan:哪隻pholloidin?? 我常用的是invitrogen的A12379 05/01 17:37
→ tchan:跟你的步驟差不太多，只是pholloidin染色時放37度C 05/01 17:38
→ tchan:然後依照細胞不同調整所需pholloidin的量，選一個最好的 05/01 17:38
→ tchan:我是用warm&fresh prepared 4 %PFA。Triton 則是用0.1% 05/01 17:40
→ tchan:之前我用0.5%的trixton時也印象中是整顆綠，沒有fiber 05/01 17:41
推 jabari:會是PBS/PBS"T"的問題嗎? tween20可以維持triton開的孔洞 05/01 18:21
→ snow200272:不知道跟cell type有沒有關係~有沒有其他細胞可以當con 05/02 12:48
→ snow200272:tol呢 05/02 12:48
→ gugu283:我調整了之後還是染不太到fiber欸...而且細胞形狀一直很爛 05/03 21:22
→ gugu283:FA和PFA固定有差嗎?還是不是專門用來培養細胞的玻片會有差 05/03 22:11
→ gugu283:我是沒有看過有人用PBST耶@@ 05/03 22:11
→ gugu283:我用的是cytoskeleton的Acti-stain 488 拜託高手解救T^T 05/03 22:12
→ tchan:data sheet用的細胞是3T3，看看是否要拿來當control 05/04 01:13
→ tchan:或者我本身經驗是WI-38以及A549都可以非常容易染到Fiber 05/04 01:14
→ tchan:找些positive control確認你的所有材料都沒問題吧!! 05/04 01:14
推 frank22004:我們全都在室溫下 05/25 13:11
→ yinshuang:你的phalloidin接的是綠色螢光，細胞當然是綠色的.... 07/21 16:03
→ yinshuang:降低phalloidin的濃度或wash久一點，應該會出現你要的。 07/21 16:05