[討論] 有人使用過Takara LA polymerase嗎?

[Virtualkay (何鎧)]

小弟最近操作clone時，使用號稱highly-fidelity的Takara LA pol.

但挑8個clone送定序後發現，許多都有point mutation，而且突變的點

都不一樣，大多突變成G/C。 不曉得有沒有人遇過類似的問題？

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 211.76.246.8
※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1399346724.A.429.html
→ blence:先前用這支發現如果是cDNA約1~2k大的,不太會有mutation
→ blence:反倒是拿plasmid量有10ng以上去PCR,連500bp也一直突變
→ Ianthegood:clone的話是你的菌有問題吧 pol出問題的機率小
→ xxtomnyxx:High Fidelity Polymerase 唯一推薦 Phusion！
→ xxtomnyxx:自己和實驗室夥伴用過後都說讚wwwwww
→ xxtomnyxx:好奇問一下你的 PCR template 來源是什麼？產物多大？
推 cort41:這隻酵素 8年當碩士生時就在用了~~~~~~~~~~超爛  換KAPA吧
推 jabari:給你一個combo.. 用Roche probemaster 再用 Roche HF 威
推 bluesnow1122:Phusion蠻貴的但是很好用~XD
推 chaunen:用KAPA的hifi P個2.3k都OK  試過1.3k 25+25cycle 也OK
→ chaunen:微晶代理的樣子 可以 A sample
→ Virtualkay:blen或許我們的狀況是類似的, 但我只做過這個cDNA
→ Virtualkay:產物約300bp, template來源是plasmid(100ng->50X dilu)
→ Virtualkay:所以大家共同的結論, 讓我決定不再買Takara了..
推 jeol1620:推 pfu ULTRA II 怕太貴可以減量然後補 taq
→ jeol1620:我們做突變或選殖  p 10K全質體都沒問題