作者cdkcyclin (cdkcyclin)
看板Biotech
標題[討論] protein-protein interaction研究方法
時間Mon May 12 06:51:19 2014
各位版友大家好，想請教一個關於研究protein-protein interaction的想法。
我的疑問是這樣的，我推測A protein是一個hydroxylase，
然後我想知道A protein是否與EGFR相互結合(目前尚不論A是否hydroxylate EGFR)，
當然，最一開始的想法就是用IP來證明。
但從我的實驗結果，我並沒有看到A與EGFR的direct interaction，
反倒是當我用mutant A protein(將活性部位突變，使其失去活性)時，
才看到有EGFR的結合。
我不能否認此突變，也許反而造成A與EGFR的結合，但從另一個角度思考，是否因為A與
EGFR結合作用的反應相當快速，因此很難從wild type的A直接看到與EGFR的結合。若真是
如此，還有什麼其他的法法可以解決我的疑問呢?
我目前的想法是，第一，我不用突變的方式來抑制A的活性，因為這樣也許會使其結構產
生改變，我改用hydroxylase inhibitor來處理細胞，將兩者結合之後，抑制接下來的
hydroxylation。第二，直接做Mass spectrometry，偵測EGFR是否被hydroxylation。
如果有版友有類似的實驗經驗，希望可以給我一些意見，謝謝大家!!
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推 skybreeze:想到的實驗是yeast tw hybrid system 但我沒做過 05/12 07:57
推 ai760721:proximity ligation assay 05/12 09:42
→ saviora:FRET 05/12 11:14
→ Ianthegood:如果是hydroxylase的話 egfr上面應該要有能被反應的 05/12 11:54
→ Ianthegood:aa吧 然後有可能從substrate來看嗎? 05/12 11:56
推 APPswe:Surface plasmon resonanceꀨSPR) 可以試看看 05/14 23:52
推 jhjhs33504:要避免偽陽(陰)性問題~可能做Mass會比較清楚吧? 05/15 04:21
推 gps0110:mass spec最直接 05/29 12:11