推 laurel007:推測是配下膠時沒壓好 06/09 15:20
→ laurel007:不然就是stacking時用更小的電壓去跑,用60~80V 06/09 15:22
→ hodala09:將pH6.8的buffer,通過0.22um過濾後再使用。 06/09 15:44
關於過濾一點,我會立刻嘗試看看,非常感謝!
補上綠色箭頭以上代表就是上層膠體的部分,這幾次我都有特地保留上層膠染色
http://ppt.cc/8sto
做下層膠做完的時候我都是用70%酒精下去壓
倒掉酒精的時候可以看出下層膠很平,也看不到那條詭異的線
但是跑完膠之後其實隱約就可以到到那條怪怪的東西跑出來,染完色更明顯就是!
※ 編輯: lidon00968 (140.130.98.85), 06/09/2014 16:02:00
→ blence:在marker那條,第1,2次有出現,第3次沒有,是補PSB的差異? 06/09 17:15
→ lidon00968:請問PSB是甚麼東西? 是系統不同 分別是ATTO和Bio-Rad 06/09 17:47
→ lidon00968:我家sample的處理都是樣品+水+sample buffer 06/09 17:48
→ lidon00968:不過蛋白萃取的方式是取0.5mg組織+500ul PBS進行超音波 06/09 17:48
→ lidon00968:樣品配好後會100度煮10分鐘 然後才進行跑膠 06/09 17:53
※ 編輯: lidon00968 (140.130.98.85), 06/09/2014 21:54:00
→ jsi:有個疑問pH6.8的buffer,通過0.22um過濾後pH值不會上升嗎? 06/09 23:36
→ lidon00968:好奇為什麼會上升? 理論是?? 今天我又再配製一次藥品 06/09 23:45
→ lidon00968:明天再來測試看看狀況是否有改善! 06/09 23:45
→ blence:protein sample buffer;你的marker那條,只有第三次沒出現 06/10 00:04
→ blence:請從PSB確認最後濃度至少有1X,以及8.8與6.8是從Tris base配 06/10 00:33
→ blence:起,至於6.8先過濾或調降電壓,除非你們只想先看到data,不然 06/10 00:34
→ blence:這兩種不是一般實驗室操作必要的條件,顯然也不會是問題所在 06/10 00:36
非常感謝,今天已經全部再重新配製所有會用到的藥品
從tris-8.8和6.8、sample buffer、running buffer都重新配置
6.8和8.8也都有作過濾的動作,明天會再試試看是否有改善
再次謝謝大家!
※ 編輯: lidon00968 (36.237.212.42), 06/10/2014 01:00:29
推 leptoneta:感覺是下膠還沒完全凝固就加上膠 06/10 11:53
→ lidon00968:我很確定我下膠凝固後,才吸掉酒精,確定是平的 06/10 19:09
→ lidon00968:才加入上層膠溶液做上層膠 06/10 19:09
推 IDIDyan:感覺是下膠濃度不均勻,前兩張圖都有一半的lane跑得頗歪 06/10 20:16
→ IDIDyan:做膠時混勻後再加,另外也有可能是機器老舊而電流過高 06/10 20:17
→ IDIDyan:試著條低電壓跑或在低溫跑看看 06/10 20:18
→ lidon00968:了解,非常感謝!! 如果要換機器,老闆可能會崩潰XD 06/10 20:49
→ IceDR:你有沒有重配10% SDS? 06/11 06:03
→ IceDR:或是RUNNING BUFFER的SDS濃度太低 之前實驗室發生過類似情況 06/11 06:05
禮拜一重新配製藥品後,總算恢復正常!
非常感謝版友們的協助!!
推測應該是那罐快10年SDS壞了,所有會使用到SDS的溶液全部都使用新的SDS配製
現在都很正常!
附上一張現在的膠圖
http://ppt.cc/2A-2
非常感謝大家!
※ 編輯: lidon00968 (140.130.98.85), 06/11/2014 13:14:14
推 puec2:哇,SDS會壞喔,這真的沒遇過。 06/12 15:31
→ puec2:上了一課。 06/12 15:31
→ hodala09:而且是在第十年才壞,前9年還是好的? 06/13 22:09
→ lidon00968:不知道.. 東西全部都測試過了 直到換了SDS才好 06/19 16:22
→ IceDR:我在不同實驗室遇過兩次這種怪膠 都是RUNNING BUFFER出事 08/02 02:54
→ IceDR:一次是有配RUNNING BUFFER STOCK沒加10% SDS 08/02 02:55
→ IceDR:然後對稀釋完的RUNNING BUFFER補對應的10%SDS就OK 08/02 02:56
→ IceDR:第二次是有人稀釋STOCK手殘忘了加STOCK 我要求重配也沒人信 08/02 02:57
→ IceDR:然後有問題的RUNNING BUFFER一用完 稀釋新的一瓶就回復正常 08/02 02:58