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正常養菌過夜,5ml的菌液IPTG誘導表現後,直接波音波破菌約5分鐘, 打一秒停一秒,後以10000 rpm於4℃離心15分鐘,用300μl PBS回溶 拿30~50ul跑SDS PAGE,跑出來可以看出有表現!!該怎麼解釋?? 一般膜蛋白有可能這樣就出現嗎??序列分析出是GPI-AP!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 123.195.12.212 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1404160341.A.07C.html
biingru:10000轉離心15分就有膜蛋白真的有點神 07/01 09:29
tsubasawolfy:不是用IPTG去induction了?還是你覺得這東西會出現在 07/01 09:51
tsubasawolfy:細菌表面? 07/01 09:51
KittyGod:膜蛋白應該要特別去分層才會分得開 一般操作都是混在一起 07/01 11:29
storm780121:inclusion body? 不過應該不溶PBS才是 07/02 14:18
leoblack:膜蛋白因為transmembrane部分是疏水性,所以需要detergent 07/02 16:41
leoblack:幫助才能從inclusion body中拉出,不然會全卡在well上 07/02 17:10
leoblack:至於要哪種detergent則要試 07/02 17:10
abcm1042:用波音波應該也打不出 你應該也需要detergent SLS? 07/02 17:26
leoblack:之前看學姐做是用microfluidizer破菌的 07/02 19:18
silverberry:上清液有跑嗎? 如果沒意外的話上清應該也會壓到 band 07/09 09:59
silverberry:如果沒有的話,那 PBS 回溶的那部分是 inclusion body 07/09 10:15
silverberry:的機會比較高。 07/09 10:15