[問題] western blot 跑膠疑問

[hahabighan (海綿飽涵 吃不飽)]

最近開始做western遇到很多小疑問

因為新的實驗室學長說的方法跟我以往做的方法有所差異

所以想問問大家學長說的是對的嗎?

1. 蛋白收完(溶於sample buffer中)只要在第一次使用時加熱

之後跑膠前就不用在加熱了

因為SB中有某些物質可以使蛋白維持一級結構


2. 為了防止蛋白在load入well後漂走所以一開始電壓要開大一點

學長都是 上膠 200V 下膠 100V


請大家為我解答一下 感恩~

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→ milkpa: 1.看配方2.我的經驗是相反，200V跑stacking不怕沒對齊？
→ roy047: 2.相反+1, 到resolving下膠時才能加速...
→ roy047: 1.的話是SDS會附在蛋白上
→ blence: 1.可參考你們的protein marker使用說明,為什麼-20拿出來
→ blence: 要先熱一下;2.protein會飄走,是他的sample buffer配方有誤
→ Ianthegood: 1應該是指DTT 但是這東西會慢慢被空氣degrade
→ wanderchang: 同1f
推 greenwind: Protein marker上註明不需再加熱……
推 gps0110: 2相反
推 ringohare: 2相反
推 westterry170: 2相反+1
推 mars52013146: 2相反+1