[求救] 有關於酒精回收失敗的因素

[a0976134 (帶螞蟻散步)]

各位研究生好 最近我有在做酵素截切DNA的切膠回收

但最近在做酒精回收卻出現匪夷所思的問題想各位請教

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酵素雙截切後跑膠有出現我要的band

加入3倍體積99.5%酒精和1/10體積的3M NaOAc

搖晃時溶液內有出現絲狀現象

-20度冷藏1小時以上後4度 12K轉速 10min

有出現白色固體沉澱 70%酒精wash過後也還在

再加水(20ul)回收前還確定pellet還在

也親眼見到pellet回溶於水中

但是跑膠卻沒出現band 測DNA值也非常的差

請問是哪個步驟有問題?或是需要多加哪個步驟比較好?



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→ Ianthegood: 以前有做過嗎
→ a0976134: 之前常做 通常有出現PELLET時 DNA量跟品質都不會太低
→ a0976134: 但是有時卻出現有PELLET 但回溶後值都很低的狀況
→ svc1213: 用什麼回收
→ micocat: 先加酒精還是NaOAc
→ Ianthegood: 如果要產量 -20就擺o/n
→ Ianthegood: 離心60min+
→ skyken10: 可能水髒了，改用TE(10,1)回溶～
→ satasumi: 片段SIZE多大?
→ a0976134: 電泳回收+酒精沉澱(先加NaOAc)
→ a0976134: 500bp以下
推 tynse71864: 如果沒有要直接往下做不要用水吧
→ satasumi: 你是在做切膠回收,還是剩餘DNA樣品回收??