作者LIAR (玻璃做的大叔)
看板Biotech
標題[討論] SDS-PAGE有可能denature不完全嗎？
時間Sun Sep 21 19:57:03 2014
我用的western是denatured的，sample buffer的SDS是1%，最近跑TGFβ2發現50kD
有表現以外，100kD附近也有很強的訊號。
由於抗體是polyclone，當然無法排除認錯，不過考慮分子量和強度，附近又很乾淨，
我有點懷疑是dimer。
不過我不懂的是既然已經用過SDS和β-me，請問這樣dimer有可能解不開嗎？
dimer應該算第四級結構吧？可是SDS和β-me不是可以解到1級結構嗎？
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起初，他們追殺共產主義者，我沒有說話，因為我不是共產主義者；
接著，他們追殺猶太人，我沒有說話，因為我不是猶太人；
後來，他們追殺工會成員，我沒有說話，因為我不是工會成員；
此後，他們追殺天主教徒，我沒有說話，因為我是新教教徒；
最後，他們奔我而來，卻再也沒有人站起來為我說話了。
《First They Came（他們首次來時）》，Martin Niemoller牧師（1892-1984）
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→ caesar0926: 這種情況我們實驗室通常看預期分子量的band就好 09/21 21:49
→ caesar0926: polyclone的通常會有較多的雜band 09/21 21:50
→ caesar0926: 如果dimer是公價鍵結才有可能不會被解開 09/21 21:50
→ caesar0926: 但若沒有加CROSSLINKER一般非共價鍵結識會被解開的 09/21 21:51
→ caesar0926: 以上個人認知 有錯請糾正!!! 09/21 21:52
→ LIAR: 加熱與否會有影響嗎？ 09/21 22:02
→ blence: 或是S=S,先前看過有paper加50?mM DTT才把高MW拉回正常位置 09/21 23:45
→ LIAR: 我加入sample buffer後，SDS=1%，β-me=5%，不會換算XD 09/22 00:54
→ Ianthegood: 還是有可能 真的要就做alkylation看看吧 09/25 11:26