[期刊] 實驗方法討論

[albee1992822 (albee)]

期刊名稱
Propionibacterium acnes induces IL-1β secretion via the NLRP3
inflammasome in human monocytes

出版年份
Published in final edited form as:
J Invest Dermatol. 2014 February ; 134(2): 381–388. doi:10.1038/jid.2013.309.

文獻網址
http://ppt.cc/xsQC

大致內容如下
以痤瘡桿菌刺激細胞看發炎路徑 確認IL-1β會不會經由NLRP3表現
再看是否由caspase1切割IL-1β使其成熟分泌
文中提到這個發炎路徑還會涉及鉀離子外流


現在小妹我不懂圖4(a)的實驗方法要怎麼做
他為什麼會用western來測,要測的是什麼


小妹資歷不深 還請各位賜教
有打錯的 先說不好意思了...
謝謝大家!!!

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 120.124.32.50
※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1413177837.A.5CB.html
推 laurel007: 利用「抑制藥」降低active caspase-1的產生
→ laurel007: 證明P.acnes可以讓caspase-1變成active form
→ laurel007: 所以lane 4使用抑制劑後，caspase-1的active form變少
→ laurel007: 許多證明signaling pathway的實驗會使用這方法
→ laurel007: 如果我有說錯的話，還請各位指正。
推 chaunen: Result 2: P. acnes -> caspase1-> IL-1B secretion
→ chaunen: glybenclamide透過抑制ATP-sensitive K+ channels 阻斷
→ chaunen: caspase1活化, (Lamkanfi et al., 2009b)
→ chaunen: 作者假設 P. acnes -> K+ exfflux -> caspase1-> IL-1B
→ chaunen: fig.4 發現glybenclamide 抑制細胞內的caspase1活化(a)
→ chaunen: 同時也抑制IL-1Bsecretion(b)
推 chaunen: 只用1種藥就下結論有點危險 如果剛好是side-effect怎半?
推 laurel007: Z-YVAD-FMK是positive control;推文真不方便Orz
推 chaunen: fig.4a 由於caspase1的active form需要切下一部份peptide
→ chaunen: 所以分子量會變小 用WB剛剛好~
→ blence: chaunen說的不太對,glybenclamide並不會抑制IL-1b分泌(4b)
→ blence: 而是抑制P. acnes->K+ exfflux,所以解釋藥物效果有針對性
推 chaunen: 我懂了! 所以glybenclamide只會抑制P. acnes造成的IL-1b
→ chaunen: 分泌 並不影響basal的secretion 凸顯K+efflux參與的重要
→ chaunen: 我果然還是太嫩了XD