[求救] RAW264.7的細胞體外減緩過敏實驗的實驗設計

[ffmichael229 (御琉光)]

發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題

若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓，
請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作或 簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除

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目前實驗的設計是想做細胞體外減緩過敏的實驗，實驗已選定某種成分做為材料，希望

這種成分能有減緩過敏的效果，因此就想看某些細胞激素(cytokine)的分泌狀況(例如:

IL-10 IL-4)，實驗的主要的設計是先以藥物溶液(藥物溶液已用MTT抓過濃度)處理RAW

細胞24小時(對照組就不會進行藥物處理)，接著加入LPS進行誘導，然後希望看到有經

過藥物先行處理的組別能夠在於細胞分泌IL-10或者IL-4的表現量有所下降，用以証明

藥物處理能夠有減緩過敏的效果，但是問題就來了，在網路搜尋文獻的過程中，有遇

到LPS要一同添加IFN-r的文獻，也就是LPS+IFN-r，我知道那個是要誘導RAW細胞(NO-t

ype)產生NO所添加的東西，但由於我並沒有很深的相關背景，所以並不了解IFN-r的添

加與否會不會對我的細胞激素表現實驗造成影響，因此第一個問題想問問若我的實驗單

純只以LPS進行誘導是否OK?? ，另外也想請問LPS的用量會是多少比較合適?

由於參考許多文獻 從1ng/ml~10ug/ml都有，不過我目前是打算採用1ug/ml，

這部分也想請問各位前輩的意見，感謝!

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※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1413360071.A.AB7.html
推 RickyKckao: IFN-r絕對會影響cytokine表現 像是induce TNF-a等
→ RickyKckao: 要看你實驗的目的來決定要不要兩個都加 如果兩個都加
→ RickyKckao: 跟單獨加 要看的意義不同 那是要看有沒有syngernize
→ RickyKckao: 或是會有antagonistic effect
→ RickyKckao: LPS的用量沒有絕對, 你可以自己在做個titrate抓最適合
→ RickyKckao: 看cytokine表現的條件
→ RickyKckao: 另外單獨只看IL-10跟IL-4的表現 來決定藥物是否有效
→ RickyKckao: 可能不是很洽當 IL-10是anti-inflammatory cytokine
→ RickyKckao: 如果藥物讓IL-10的表現變低了, 那也有可能造成更嚴重
→ RickyKckao: 的過敏 的確許多過免都是偏向Th2 response 但你可能不
→ RickyKckao: 能單單只選幾個M2的代表性cytokine來show藥物的功效
→ RickyKckao: 再者 LPS+IFN-r 會誘導M1基因的表現 那你想測的IL-10
→ RickyKckao: 跟IL-4可能就更不好測了...