[求救] in situ 固定時detergent加太少

[Gilver (吳右手)]

小弟我在做植物的RNA in situ hybridization 時，

不小心在第一步使用的組織固定液4% paraformaldehyde in PBS溶液中

將Tween 20和Triton X100 兩種detergent誤加成原本建議濃度0.1%濃度的千分之一，

但在抽氣固定的時候有將組織充分抽氣滲透 (抽到60mmHg組織才上浮)

想請問各位先輩的意見，如果detergent濃度加低了會不會對雜合結果造成顯著影響呢?

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※ 編輯: Gilver (1.160.85.28), 12/19/2014 01:07:32
推 Ianthegood: 沒有permabilise你的probe怎麼進的了膜
→ Gilver: 因為後面還有Protease處理，還會再細胞打洞一次
※ 編輯: Gilver (140.112.52.118), 12/23/2014 21:06:33
→ Ianthegood: 如果膜沒破 你protease只吃的到extracellular domain
→ Gilver: 那請問有機會在脫蠟後hybridization前再幫細胞打洞嗎？
→ Gilver: 比如說在4%formaldehyde或PBS的缸裡加入triton之類的
→ Ianthegood: 你做做看嘛 失敗了就重來嘛 這次就不要搞錯