[問題] 流式細胞儀的isotype

[asdfg0612 (青蛙)]

【問題】：
想請問一下流式細胞儀是不是不同樣品間
是不是該要重跑不同的isotype control ?




【問題起因】：
最近在跟教授討論檢測完的數據處理跟怎麼報告
教授認為我計算surface marker表現量的方法是有問題的

他認為isotype會切掉同一個區間後的比例
所以我應該在表上畫一條直線來確定我isotype control是一致的

這樣的話 positive marker的表現量應該會比我框的範圍高很多



【個人看法】：
不過我覺得因為我的實驗是屬於使用過濾方法來進行細胞純化
每批樣品來源已經是不同實驗體了 過濾後的樣品還會分為三個部分
再怎麼說isotype control的表現結果也不應該會長一樣
所以我每個樣品都會跑一次isotype control

更不用說是直接像老師說的
用同一條線去畫分出不同樣品測試後的surface marker表現量
(像是
      |  |
cont. |__|_
      |  | \  樣品A
      |__|__\___
         |
         |
      |  |  ____
cont. |  |-/
      | -|   樣品B
      |__|______       這樣一條線切下來全切同一區塊

         marker


所以想請問一下 我這樣的想法有沒有問題 ?
如果沒有問題的話有沒人能幫忙給個建議讓我比較容易去說服老師 ?



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※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biology/M.1466244629.A.7FF.html
推 conective: isotype是看樣品與抗體非專一性結合背景 若樣品不同
→ conective: 理應染一組ISOTYPE 而不是一組通用 那要以哪組為主?
→ conective: 比如說有些細胞刺激前後背景值就不一樣
→ conective: 真正要分析時要以實驗條件下的ISOTYPE作為判斷陰陽標準
推 abcam: 目前 flow的isotype我只相信 DAKO&BD 這兩個品牌～