[問題] Fibroblast isolat

[s0086 (腐出肩)]

【問題】： 初代培養纖維母細胞


【問題起因】：我們老闆要我試著使用大鼠或倉鼠的皮取出纖維母細胞，
我的做法是先把整塊皮取下，之後泡0.2% Dispase 一天，然後將真皮層用刀片括下，
再把真皮泡在0.1%的Collagenes type 4 一天，之後用細胞分離篩將消化液過篩，
加入無血清DMEM，離心，用DMEM 將 pellet打散，然後將細胞液培養。
現在做了三次都是底部看的到細胞，但是都是圓的，完全沒有展開。
請問有大大能幫忙隔空抓藥是哪邊有問題嗎? 或是有其他黃金Protocal可以幫忙嗎?
快要拿人頭去見老闆了

謝謝


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公主病是因為好男人誕生出來的，壞男人是因為公主病進化出來的。

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 27.105.164.17
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→ turtle24: 泡兩天感覺細胞都死光了
→ e104582001: coating?
※ 編輯: s0086 (27.105.164.17), 12/19/2016 02:12:29
→ s0086: 這個做法是用之前在教學醫院取人體簡體使用的，而且幾乎沒
→ s0086: 都可以養的成功。
→ short945: 以前是用十幾天的數胚在滅菌過的銅網上面磨然後洗下來
→ short945: e.g. https://goo.gl/YH1E6k
→ short945: 只是以前第三步不是用針筒吸吹而是把除去內臟的鼠胚
→ short945: 放在銅網上面"均質化"